Inertsil HILIC色谱柱操作说明

1.色谱柱信息

  Inertsil HILIC液相色谱柱是在高纯度硅胶基质上键合二羟基丙基的HILIC (Hydrophilic Interaction Chromatography)模式色谱柱，适合用于强极性至中等极性例如一些极性药物、小生物分子的分离。Inertsil HILIC液相色谱柱从硅胶基质的合成，到化学处理和装填后的性能检测，都是在本公司严格的产品控制下进行，因此不同批次的柱与柱之间具有优异的重现性;通过独有的装填技术填装的HILIC柱柱床密度均一稳定，从而确保色谱柱具有高柱效，在极性和亲水性化合物如碳水化合物、代谢物、有机酸、有机碱、氨基酸、蛋白及多肽水解物等的分离过程中，可作为改变柱选择性和提高分辨率的分离工具。

  为了能长期保持Inertsil8 HILIC液相色谱柱的优越性能和正确的使用色谱柱，在使用色谱柱之前请仔细阅读本说明书。

2.使用前的检查与须知事项

●检查包装箱的外观有无异常。

●打开包装，检查色谱柱的填料名称、尺寸规格、连接形式是否相符。

●色谱柱中封存流动相为乙腈/水=95:5, v/v。

3.色谱柱填料规格

4.色谱柱安装与操作

  色谱柱在运输过程中，两端用堵头密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先请确保系统中的溶剂和液相柱中封存溶剂是互溶的。如果不能互溶，请采用一种能够与系统及色谱柱都能互溶的溶剂对系统进行充分过渡之后再将色谱柱连接到系统中，并注意流动相的方向要与柱.上标记的方向保持一致。我公司提供的常规液相色谱柱标准接头型式为1/ 16英寸Waters接头螺丝型(如下左图)， 同时还有耐高压液相系统的UP型(如下右图) ( 目前HILIC系列暂不提供UPLC柱)。如果需要其他接头形式请另行咨询。

色谱柱连接好之后，请确认无漏液现象之后再进行后续操作。

  新的HILIC柱是保存在乙腈/水(95:5, v/v)的溶液中，在储存和运输过程中，硅胶填料可能会干涸,推荐用纯的乙腈冲洗10~20倍柱体积对色谱柱进行活化，流速从0.1mL/min缓慢上升到最佳流速。(如果在活化过程中即发现压力和基线不正常时，请及时联系我公司工程师及时处理。)然后再用不含缓冲盐的流动相进行平衡20倍柱体积，再用流动相平衡，待压

力和基线稳定之后，再进样分析。

5.样品与流动相

  为避免色谱柱堵塞，所有样品及溶剂，包括缓冲溶液在内，在使用前必须用0.45μm或者0.22uμm的滤膜过滤。样品溶剂需要含60-100%的有机溶剂，水的比例应尽量小，推荐5%的水作为自动进样器的清洗液。适用于HILIC分离的缓冲盐体系为甲酸盐和乙酸盐，因为即使再很高比例的有机溶剂中它们也有很好的溶解性。避免使用磷酸盐及其他低溶解性缓冲盐，以防析出堵塞色谱柱。对于大多数分析样品，推荐的缓冲盐浓度为5--20mM。避免使用其他非挥发性缓冲盐、TFA或者离子对试剂，它们会干扰HILIC分离机理，并抑制MS信号。通常的HILIC应用中，一般使用50-95%浓度乙腈的水溶性缓冲盐，如甲酸盐、乙酸盐或者它

们的酸作为流动相。流动相使用前请务必进行脱气。

6.色谱柱的保养

●pH HILIC色谱柱可在pH2 ~7.5范围内使用，为保持色谱柱良好的寿命，请避免较强的酸或碱性样品或者流动相进入色谱柱。

●耐压HILIC常规色谱柱耐受压力为20MPa, HP系列耐压为50MPa，但是正常的压力建议控制在耐受压力的2/3以下。长时间在高压下运行会对色谱柱造成难以修复的损害，因此系统压力升高之后，建议尽快排查系统，如果是色谱柱压力升高，请及时采用适当溶剂冲洗色谱柱。

●温度 最高操作温度为60℃，长时间在高温下操作会显著降低色谱柱寿命。

●冲洗

1.新柱平衡:新柱是保存在高比例的有机溶剂中，建议先采用色谱柱保存流动相平衡色谱柱一段时间，观察基线和压力是否正常，然后再通入流动相。如果流动相中不使用缓冲盐或离子对试剂，直接用流动相平衡即可;如果流动相使用缓冲盐，先要用高比例的水相充分过渡20倍柱体积，然后进行流动相平衡。

2.使用完毕后的清洗、保存及再使用时流动相的过渡:

①使用完毕后，先用高比例的水相进行冲洗约20倍柱体积。

②如果流动相中不使用缓冲盐或离子对试剂，上述①完毕后，用100%的有机溶剂冲洗约20倍柱体积，然后此条件下进行保存，再使用时直接冲流动相即可。

③如果流动相中使用缓冲盐或离子对试剂，上述①完毕后，用100%的有机溶剂冲洗约20倍柱体积，然后此条件下进行保存，再使用时请务必用高比例的水相充分过渡20倍柱体积，再通入流动相。

●储存色谱柱 长期不用， 建议日常冲洗方法完成之后，再用纯乙腈冲洗20倍柱体积，然后保存在纯乙腈中，之后卸掉色谱柱，两端用堵头密封，并放在温度变化小的场所。