Xterra色谱柱的启用（安装、平衡和柱效测试）

每一根XTerra™色谱柱都有柱性能测试报告Performance Test Chromatogram 和所用填料的分析报告Certificate of Analysis，填料的分析报告储存在色谱柱包装盒内的技术信息CD上，是所用填料的批次分析报告，其中包括填料的批号、填料颗粒键合前和键合后的分析数据、测试结果和所用的测试条件;性能测试报告是针对每根色谱柱的测试报告，包括以下信息:填

料批号、色谱柱序列号，USP塔板数、拖尾因子，容量因子以及所用的测试条件。用户应该储存这些信息以便在将来做参考。

a.色谱柱的安装

  提示:以下的流速适用于4.6mm内径，粒径为5μm的色谱柱，请根据色谱柱内径、长度、填料粒径以及压力适当地对流速进行调节。请参考第三节了解如何根据色谱柱的规格调整流速，参考第五节了解有关HPLC系统连接的更多信息。

1.冲洗含有任何缓冲盐的泵系统，将色谱柱入口端连接到进样器的出口端，色谱柱上的箭头标明了流动相的流向(先不要接检测器)。

2.在0.1mVmin流速条件下用100%甲醇或乙腈冲洗色谱柱，然后在5分钟内将流速升至0.5ml/min。

3.当溶液均匀地从柱子出口流出时，停掉流速，将色谱柱出口端接到检测器上(这样操作可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡)。

4.按照步骤2的方法逐渐提高流速。

5.一旦压力达到稳定值并且基线平衡好后，则进入下一步操作。

说明:如果流动相中含有低浓度的流动相改性剂如离子对试剂，要达到完全平衡可能需要100倍甚至200倍柱体积的流动相:此外，对于含有甲酸或甲

b.色谱柱平衡

  XTerra™色谱柱是用100%乙腈保存的，在使用其它的流动相系统前一定要确保流动相和色谱柱内溶剂的“相容性”。至少用10倍柱体积的流动相平衡色谱柱(见表1中不同规格色谱柱的柱体积数值)。

为了避免流动相中的缓冲盐在色谱柱或系统中析出，在换上流动相之前，需要用5倍柱体积的水与有机溶剂的混合溶液(将缓冲溶液用水替代，要求有机溶剂的含量比流动相中的含量略低或相等，如在使用60/40的甲醇/缓冲盐流动相之前先用5倍柱体积的60/40甲醇/水溶液冲洗色谱柱)。

c. 测试色谱柱的柱效

1. 在开始使用色谱柱分析样品前先测量色谱柱的柱效，沃特世建议选用合适的待测物测试柱效，如采用色谱柱性能测试报告中的样品和条件[加入柱效测试条件]。

2.计算塔板数，用这个数据作为对照，定期监控色谱柱的柱效。

3.随着色谱柱的使用，需要定期作同样的测试以便追踪色谱柱的性能变化，由于不同仪器的管路连接、操作环境、系统电路、所使用的溶剂和试剂的质量、色谱柱条件以及操作者的技术都有可能不同，因此在不同的HPLC系统上测试的结果可能会有一些差别。