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面议血清是基础培养基中极为重要的细胞生长和粘附因子、激素、脂质和矿物质来源。此外,血清还可调节细胞膜通透性,并可作为向细胞内运送脂质、酶、微量营养素和微量元素的载体。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。
胎牛血清( Fetal Bovine Serum)是通过无菌手术剖腹后取胎,穿刺心脏采血制成。胎牛血清中所含的对培养细胞有害的成分(抗体等)最少,故质量很高。
血清一般保存在-20℃以下保存,使用之前应放置2-8℃冰箱过夜溶解。使用建议1周-2周内用完,如用量小建议小包装分装冻存,以免反复冻融,血清失效。
热灭活是指56℃,30分钟加热已wanquan解冻血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理之目的是使血清中补体成份(complement)去活化。除非必须,一般不建议作此热处理,因为会造成沈淀物之显著增多,且会影响血清之品质。
产生沉淀的原因有许多种,但普遍是血清中脂蛋白(lipoprotein)变性及解冻后血清中存在血纤维蛋白(fibrin)造成的。这些凝絮沈淀物不会影响血清本身之品质;可用离心3000rpm,5min去除,或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沈淀物,因为会阻塞过滤膜,并且会导致营养流失,细胞状态不好。
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主要功能
1.提供维持细胞指数生长的激素。
2.酸碱缓冲液作用。
3.细胞贴壁、铺展在塑料基质上所需因子来源。
4.提供蛋白酶抑制剂,使细胞传代时细胞不受伤害5提供结合蛋白,结合或调控维生素、脂类、金属和其他激素的结合物质的活力;与有毒金属和热原质结合,解毒作用。
在细胞培养过程中,经常加入5%-20%的胎牛血清,最常使用Gibco澳洲胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱,影响后续实验的结果,我们在实验中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培养293T细胞,效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的Gibco FBS或者20%的Gibco胎牛血清,要根据具体 细胞选择合适的Gibco胎牛血清浓度。
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