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构建带有UMT的Illumina NGS文库

时间：2020-11-10 阅读：1031

构建带有UMT（Unique Molecular Tags）的Illumina NGS文库

ThruPLEX^® Tag-seq Kit

· 可信赖的实验结果。ThruPLEX Tag-seq 技术提供了多达1,600万个分子标签来纠正测序误差，
   提供可信的变异检测分析。
· 发现更多，成本更低。结合基于杂交技术的目标序列富集系统可分析数百个基因，同时分析突变和结构变异。
· 每次都可获得高质量文库。单管操作，2小时，3步操作流程。使用简便，可减少使用者操作误差和污染发生。
· 省时的生物信息学分析方案。采用Curio Genomics提供的云服务软件或开源软件可以快速获得
   研究结果。
· 珍贵样品分析成为可能。更低的DNA起始量，以往由于起始量太低而不能分析的样品也可以分析了。
   ThruPLEX Tag-seq可以1 ng至50 ng cfDNA或片段化的dsDNA起始，兼容多种样品类型。

■ 产品说明：

ThruPLEX Tag-seq采用带有特别分子标签（UMT）的ThruPLEX引物构建带有分子标记和样品检索引物的Illumina NGS文库。每个试剂盒包含超过1,600万个特别序列用于在扩增前标记每条DNA小片段，可以在文库制备、目标富集和数据分析过程中追踪DNA小片段，以检测低丰度等位基因或计数独立片段。采用ThruPLEX 技术设计及优化，可以1到50 ng DNA起始构建高多样性、高重复性文库。整个流程在单管或单孔中就可完成，只需3步，2小时，无需中间纯化步骤和样品转移，避免了操作误差和样品损失。ThruPLEX Tag-seq Kit 包含所需全部试剂，包括可以多重标记96个样品的检索引物。纯化和定量后，文库可以采用标准Illumina测序试剂和流程在Illumina NGS平台进行测序。

图1. 单管，三步操作流程。 ThruPLEX Tag-seq Kit以1-50 ng DNA起始构建检索引物文库只需3步：末端修复，接头连接和高保真文库扩增。无需纯化和样品转移步骤。简化的工作流程，在单管或单孔中2个小时即可完成，避免样品损失，增强了阳性识别。

图2. ThruPLEX DNA-seq Kit技术概要。ThruPLEX技术以片段化双链DNA或游离DNA起始，只需3步反应，简单高效。

图3. 减少背景，结果更可靠。以30 ng 1% Horizon cfDNA standard，采用 ThruPLEX Tag-seq构建文库。Agilent SureSelect富集目标区域，~5,000X覆盖度测序，采用Curio Genomics生物信息学平台分析数据。采用原始数据分析，EGFR 的突变（黄色点）会被背景误差遮盖（左图）。而在数据分析过程中使用UMT修正误差，突变更容易识别（右图）。

图4. 显著提高信噪比，发现更多。以30 ng（A）或10 ng Horizon cfDNA standard采用ThruPLEX Tag-seq构建文库，240 KB定制panel（NimbleGen SeqCapEZ）富集目标区域，HiSeq 2500 ~5,000X覆盖度测序。Curio Genomics生物信息学分析平台进行数据分析。
*数据来源于Takara Bio Inc.

■ 产品组成

· Template Preparation Buffer (Red）
· Template Preparation Enzyme (Red）
· Library Synthesis Buffer (Yellow）
· Library Synthesis Enzyme (Yellow）
· Library Amplification Buffer（Green）
· Library Amplification Enzyme（Green）
· Nuclease-Free Water（Clear）
· Indexing Reagent

■ 保存

－20℃

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产品规

TAKARA	R400584	ThruPLEX Tag-seq 6S（12）Kit	12 Rxns
TAKARA	R400585	ThruPLEX Tag-seq 48S Kit	48 Rxns
TAKARA	R400586	ThruPLEX Tag-seq 96D Kit	96 Rxns

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