细胞冻存液的配方是什么？

　　(一)细胞冻存

　　1. 配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的冻存细胞培养液;

　　2. 取对数成长期的体细胞，除去旧细胞培养液，用PBS清理。

　　3. 除去PBS，添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来;

　　4. 抽滤1000rpm，5min;

　　5. 除去蛋白酶，添加适量配置好的冻存细胞培养液，用塑料吸管轻轻地吹打使体细胞匀称，记数，调整冻存液中体细胞的后相对密度为5牙周106/ml～1牙周107/ml;

　　6. 将体细胞分装进冻存管中，每管1～1.5 ml;

　　7. 在冻存管上标出体细胞的名字，冻存時间及作业者;

　　8. 冻存：标准的冻存程序流程为减温速度-1～-2℃/min;当溫度达-25℃下列时，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可快速渗入液态氮中。也可将配有体细胞的冻存管放进-20℃电冰箱2h，随后放进-70℃电冰箱中留宿，取下冻存管，移进液氮容器内。

　　(二) 细胞复苏

　　1. 从液氮容器中取下冻存管，立即渗入37℃温开水中，并时常摇晃令其尽早溶化。

　　2. 从37℃水浴中取下冻存管，开启外盖，用塑料吸管吸出来体细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上细胞培养液，搅拌;

　　3. 抽滤， 1000rpm，5min;

　　4. 弃去上清液，添加含10%小牛血清细胞培养液重悬体细胞，记数，调节体细胞相对密度，打疫苗塑造瓶，37℃恒温箱静放塑造;

　　5. 隔日拆换一次细胞培养液，再次塑造。

　　常见问题

　　1.从繁衍期到产生高密度的单层细胞之前的塑造体细胞都能够用以冻存，但zui好是为多数成长期体细胞。在冻存前一天*是换一次细胞培养液;

　　2.将冻存管放进液氮容器或从这当中取下时，要搞好安全防护工作中，以防冻伤;

　　3.冻存和再生zui好用新配置的细胞培养液。