琼脂培养基，作为微生物学实验中的基础工具，以其的物理和化学性质，在细菌培养、鉴定、分离及保存等方面发挥着重要作用。本文将从琼脂培养基的定义、制备、使用及保存等方面进行详细阐述。

一、琼脂培养基的定义

琼脂培养基，英文名称为agar-based medium，是2019年公布的结核病学名词。它是以琼脂作为赋形剂的固体培养基，通过琼脂的凝固作用，为微生物提供一个稳定的生长环境。琼脂粉一般为白色、淡黄色或淡灰色粉末状，在冷水中不溶解，但加热煮沸或高压灭菌后可使琼脂溶解，冷却后凝成固态。

二、琼脂培养基的制备

琼脂培养基的制备过程相对复杂，但每一步都至关重要。以下是制备琼脂培养基的基本步骤：

1. 准备原料：根据实验需求，称取适量的琼脂粉、蛋白胨、酵母浸粉、葡萄糖等原料。

2. 溶解混合：将原料加入适量的纯化水中，搅拌均匀，确保无团块。注意水温不宜过高，以免琼脂表面吸水变硬。

3. 调整pH值：使用酸碱溶液调整培养基的pH值至适宜范围，通常为7.0左右。

4. 加热灭菌：将混合均匀的培养基进行高温高压灭菌处理，以杀灭其中的细菌和其他微生物。灭菌条件一般为121°C、15-20分钟。

5. 分装凝固：将灭菌后的培养基分装至试管或培养皿中，待其冷却凝固。

三、琼脂培养基的使用

琼脂培养基在微生物学实验中有着广泛的应用。以下是其主要用途：

1. 细菌培养：将待培养的菌种接种到琼脂培养基上，通过划线、点菌或涂抹等方式，使细菌在培养基上生长并形成菌落。通过观察菌落的形态、大小、颜色等特征，可以进一步鉴定和分离细菌。

2. 菌落计数：利用琼脂培养基进行细菌计数，通过统计培养基上的菌落数量，可以评估样品中细菌的含量。

3. 菌种保存：琼脂培养基还可以用于菌种的长期保存。通过调整琼脂的添加量，可以制备出适合菌种保存的半固体培养基。

四、琼脂培养基的保存

琼脂培养基的保存对于保持其质量和延长使用寿命至关重要。以下是保存琼脂培养基的注意事项：

1. 保存温度：购买的一次性细菌培养平板一般应放置在4℃冰箱中保存，但也有文献指出，室温保存可能更有利于细菌培养基。然而，对于已经开启包装或自制的培养基，应尽量避免长时间室温保存，以防细菌污染。

2. 保存时间：保存时间与平板的密封程度、培养基厚度、冰箱环境等因素有关。购买的一次性培养基通常有包装袋密封，保存时间可达1个月至6个月不等。而已经开启包装或自制的培养基，保存时间较短，一般不宜超过半个月。

3. 存放方式：培养基应倒置存放，避免冷凝水珠滴落到培养基上。同时，应将培养基放置在远离风扇、细菌培养物、水汽循环的冰箱部位，以防水分蒸发和霉菌生长。

4. 观察与检查：在使用前，应仔细观察培养基是否干裂、污染杂菌。如有异常，应及时处理并更换新的培养基。

五、结论

琼脂培养基作为微生物学实验中的基础工具，其制备、使用及保存都需严格遵守相关操作规程。通过科学合理的制备和保存方法，可以确保琼脂培养基的质量和稳定性，为微生物学实验提供可靠的支持。