尿嘧啶糖基化酶

Uracil-DNA Glycosylase（UNG、UDG）

产品介绍：
尿嘧啶DNA糖苷酶（UNG）来源于大肠杆菌重组克隆表达，分子量为25kDa，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶。UNG酶对RNA无活性，主要应用于PCR扩增产物的防污染。其作用原理基于：如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解该PCR扩增产物。

规格：1U/μl

储存缓冲液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，150mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，0.05% Tween20，50%glycerol.

试剂组成：

10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0，25℃)，100mM NaCl，10mM EDTA，1mg/ml BSA.

活性定义：
37℃条件下，1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为1单位。

保存条件：
每天或每周使用保存于-20℃。*储存应保存于-70℃保存，并严格避免-70℃保存时反复冻融。

质量控制：

1、SDS-PAGE电泳纯度大于98%；

2、1U UNG在 37℃处理3分钟后，103拷贝以下含U模版应*降解，不能产生扩增产物。

3、无核酸外切酶和核酸内切酶活性、RNase酶活性；

（1）SDS-PAGE 银染纯度大于98%

（2）UNG 酶消化能力试验

    以700bp含dUTP的不同拷贝数基因片段为模板，分别加入含0.5U UNG酶的50μl PCR反应体系，50℃ 消化2min，94℃ 灭活4min后进行PCR扩增反应。

A. Biori UNG

B. Promega UNG

Lane 1：Negative control （no template）；

Lane 2：positive control（no UNG）；

Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template 

结果表明，我们的UNG酶与Promega UNG酶消化效果相当，均可以有效控制108拷贝以下含有U-DNA的模板的污染。

（3）UNG酶稳定性实验

将UNG酶置于37℃进行7天加速试验。以含dUTP的（106、107、108、109 copies/ml）基因为模板，采用含dUTP的体系进行PCR扩增，50μl反应体系加入0.5U UNG酶，于50℃消化2min，94℃灭活4min；然后进行PCR扩增反应。以Promega公司UNG酶为对照，考察UNG酶对模板的消化效果。

1：negative（No template）； 

2～9：postive （104、105、106、107、108、109、1010、1011 copies /ml， No UNG）；

10～14：control Promega UNG（106、107、108、109、1010 copies /ml）；

15～19：Sample UNG（106、107、108、109、1010 copies/ml）。

1～4：Sample UNG（106、107、108、109 copies/ml）；

5～8：Control Promega UNG（106、107、108、109 copies/ml）； 

9：negative （No template）；

10～13：Postive （106、107、108、109 copies/ml，No UNG）。

结果表明，我们的UNG酶与Promega UNG酶稳定性相当，均可以在37℃加速7天，仍保持对107copies/ml含dUTP模板的消除能力。

反应条件：

1、Incubate the product for 2 min at 50℃；

2、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.

注意事项：
1、避免多次冻融，切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有*影响。

2、尿嘧啶DNA糖基酶可以在PCR反应前清除不慎污染的U-DNA分子。为有效防止污染，一个实验室必须在所有的PCR反应中均使用dUTP作为dNTPs组分之一进行扩增，使所有扩增产物都成为U-DNA。

3、由于不同基因碱基组成不同，因此有些基因对UNG酶残留活性十分敏感，如发现使用UNG 酶影响扩增灵敏度，可以尝试降低UNG酶的用量或对反应体系中dTTP与dUTP的比例进行调整。*使用我公司生产的TS-UNG，该酶灭活更加*，可以大大简化上述试验过程。