2,3,5氯化三苯基四氮唑 TTC

2,3,5-氯化三苯基四氮唑，又称四唑红，简称TTC，TTZ，或TPTZ，一种脂溶性光敏感复合物，即可用来检测种子的生存能力，也可用来检测哺乳动物组织的缺血梗塞。检测机制在于TTC本身可作为一种氧化还原指示剂，活细胞内的脱氢酶（尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶）可以将TTC还原为红色甲臢化合物TPF（1,3,5-triphenylformazan）。对于种子或者植物组织来说，染色结果为活组织被染成不同程度的红色，死组织或者无生命力的组织不着色。对于缺血梗塞组织，因组织坏死脱氢酶活力丧失呈现苍白色，而正常组织呈深红色。TTC常用的染色浓度为2%（w/v）(货号：G3005)，也可根据组织类型做浓度的适当调整。

染色方法

1.1  染色工作液的配制

TTC通常用磷酸缓冲盐溶液来配制，pH范围为6.5-7.5之间，常用的工作浓度为2%，也可用1%或者更低的浓度，根据自身实验体系调整。

可使用以下的缓冲盐体系配制：

1）取9.078g KH2PO4（Mw：136.09）溶于1L去离子水内，制备成66.7mM KH2PO4储存液；取9.472g Na2HPO4·H2O（Mw：137.99）溶于1L去离子水内，制备成68.6mM Na2HPO4储存液；将两份KH2PO4储存液与1份Na2HPO4储存液充分混合，即得到需要的磷酸缓冲液溶液。

2）根据需要的TTC工作液浓度来制备，如加入2g TTC粉末到100ml混合的磷酸盐缓冲液中，即得到2%的染色工作液。此时的溶液pH值在6.5-7.5之间。此工作液可装到不透明的白色瓶或者棕色瓶子内，4℃保存几个月稳定。

【注意：TTC染色液的缓冲体系可根据自己的实验习惯来调整；也可用去离子水来溶解配置成10mg/ml的储存液，过滤除菌，建议此法染色液当天使用。】

1.2 染色方法（动物组织）

1）取新鲜组织切片放到装有TTC染色液的染色容器内，37℃避光孵育15-30min，边孵育边观察颜色变化；【注意：TTC染色液可重复使用2-3次，可将用过的TTC染色液放到新的容器内继续使用。】

2）【可选】轻柔的吸取缓冲液（如1×PBS）将组织表面多余的染色液冲洗掉；

3）此时即可观察或者拍照。若需长久保存，用4%多聚甲醛溶液（货号：P1110）固定10-20min。

注意事项

1）本品具有微量的光和热敏感性，使用以及存放的过程中避免长时间曝光或者接触到过高温度下。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

参考文献：
《Regulation of VDAC1 contributes to the cardioprotective effects of penehyclidine hydrochloride during myocardial ischemia/reperfusion》 作者:Duomao Lin,Boqun Cui,Jiayue Ren,Jun Ma 期刊:Experimental Cell Research 影响因子:3.309 PMID:29630893
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影响因子:3.361 PMID:30502652
《The IRE1 signaling pathway is involved in the protective effect of low-dose LPS on myocardial ischemia-reperfusion injury》 作者:Ting Wu,Nan Jiang,Zhenhua Ji,Guoyu Shi 期刊:Life Sciences 影响因子:3.448 PMID:31202841

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