T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液

在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）和传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA，其功能主要是使细胞间的蛋白质水解，使组织或细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。
胰蛋白酶（Trypsin）简称胰酶，是由动物猪胰脏中提取的一种蛋白酶制剂。胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，打开细胞-细胞，细胞-基质之间的连接从而使细胞从培养板上脱落下来并使细胞分散成单个细胞。胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。细胞消化用胰蛋白酶常用的工作浓度为0.25％，pH为7.2-7.4之间，用滤器过滤除菌。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和，使用后培养瓶要*清洗，否则再培养时细胞容易脱壁。
胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。用含血清培养液终止其对细胞的消化作用。
使用说明：1、贴壁细胞的消化：贴壁细胞在培养瓶中长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，扩增、传代。对于悬浮生长细胞和贴壁不太紧的细胞如SP2/0，293等，可直接吹散后分瓶；而对于贴壁较紧的细胞如Hela，HepG2，CHO等，则需要以细胞消化液消化后，才能脱落和分散，扩瓶。一般操作过程为（以下操作均必须严格按无菌操作的要求进行）：
   （1）将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去； 
   （2）加入0.25％胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多（依培养器皿的大小而定），以使充分浸润； 
   （3）一般消化时间约为13分钟，肉眼观察瓶底由半透明（细胞单层连接成片）转为点状透明（出现细小空隙）时，弃去细胞消化液，并加入适量的*培养液终止消化，吹打分散；  
   （4）视实验目的分入多瓶继续培养，一般比例为一传二到一传四的。 
2、组织的消化：不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

注意事项：1．由于组织或细胞性质不同，实验人员应依据具体情况，确定佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况；
2、分装胰蛋白酶-EDTA消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染；
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建议-20℃保存，切忌反复冻融，
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套进行试验操作。

相关文献：

《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者:Youbing Tu,Yubing Liang,Yong Xiao,Jing Lv,Ruicong Guan,Fei Xiao,Yubo Xie,and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影响因子:3.486 PMID:30858699

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