产品名称： PC-9/GR耐药株;人肺腺癌细胞吉非替尼耐药株

产品编号： JSK0259

细胞数量： 1*10^6

细胞种属： 耐药株

生长特性： 贴壁

培养基： DMEM

培养条件： 800ng/mL吉非替尼

细胞冻存： 液氮冻存（冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO）

细胞运输： 干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

注意事项

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经*挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

八、试剂盒使用中的注意事项：
  1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用
  完，板条应装入密封袋中保存。
  2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
  3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样
  时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
  3、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样
  本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定
  ，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。 
  4、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
  5、底物请避光保存。 
  6、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 
  7、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 
  8、本试剂不同批号组分不得混用。

八、 PC-9/GR耐药株;人肺腺癌细胞吉非替尼耐药株合作单位：
  中国医科大学、复旦大学、北京大学、贵阳医学院、中国农业大学
  天津疾控中心、江南大学、山东大学、青岛大学 、香港大学
  云南省产品质量监督检验研究院

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