技术指南 | 琼脂糖凝胶电泳详解
时间：2021-10-26 阅读：6193
创造了Tiselius电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法，并证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的。
电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
1.琼脂糖凝胶电泳原理:琼脂糖凝胶具络,物质分子通过时到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:心兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
2.琼脂糖凝胶电泳用途:用于DNA切胶回收；用于DNA分离；用于佐证DNA是否重组、质粒是否切开以及其他分子生物学研究
3.琼脂糖凝胶电泳特点：
I、优点：
因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗
对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象。
凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质。
透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。
不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定
有热可逆性
II、缺点：
机械强度差，易破碎，浓度不能太低。
易被细菌污染，不易保存，临用前配制。
琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立即固定染色。
与PAGE相比，分子筛作用小，区带少。
1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液.
取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶*疑固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加
在点样板或pa rafi lm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).
加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.
DNA分子的大小
凝胶的浓度
DNA的构象
使用的电压
琼脂糖的种类
电泳缓冲液
嵌入染料的存在
以上这些因素都会对电泳产生影响，具体详细内容就不在这里给大家一一介绍了，以后大家遇到什么问题的话，都可以从这几方面入手去找问题