小鼠活化白细胞黏附分子(ALCAM)检测试剂盒

本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析小鼠血清、血浆、细胞裂解液或细胞培养上清中ALCAM的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是ALCAM多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠ALCAM呈正相关。

检测指标：CD166；ALCAM
检测范围：78pg/ml～5000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜2pg/ml

产品组成：

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）
有效期：6个月(4℃)；12个月（-20℃）

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

小鼠活化白细胞黏附分子(ALCAM)检测试剂盒原理:

问：请问标曲是每次都要做吗？

答：是的，每次实验，孵育时间，洗板次数等等条件均不一样，不同实验的标曲不能混用，做一次实验需要做一次标准曲线，并且用当次，同一块板上的标准曲线结果去计算板内样品的浓度，才能得到准确的结果。

问：做预实验时每种要做几个复孔呀？

答：预实验视情况而定，如果整个板子孔数较为充足，建议两个复孔，如不充足，单孔也可以。要尽量保证实验过程中加样准确。

问：血清样本少量溶血，颜色稍深，对结有影响吗？

答：会有影响，建议取样时需注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。

问：试剂盒有推荐稀释浓度还需要自己测吗？

答：试剂盒一般会给出不同样品的推荐稀释比例，但是为大致范围，还是根据自己的样本情况，设计预实验测量计算。

问：加完终止液之后测的几次数据差别也蛮大？

答：加完终止液后，显色反应也不是永远停止，形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深，建议在15 min内读数。

问：副孔差别比较大，是没洗干净吗？

答：复孔值差异较大，主要原因应考虑加样是否准确，洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。

问：配好的抗体没用完如何保存，可保存多久？预实验用了一个试剂盒里面的部分板子和试剂，剩下的板子和试剂还能继续用于正式实验吗？

答：一般来讲，配好的母液，可以在四度保存，多一个月左右。剩下的板子和试剂是可以继续用于正式实验的，间隔时间不要太长，一个月之内均可，需注意试剂避免污染，板子保持干燥。

问：后显示的OD值在多少之间属于可用值，有要求吗？

答：有的，建议标准曲线高浓度点的OD值在2.0左右较好，也可参考说明书标曲的数据。

问：样本总是在标准曲线之外，稀释100倍也是，怎么办？

答：在设置稀释倍数之前，需要参考相关文献，对于一些表达*的蛋白，确实会出现这种情况，建议继续提高稀释比例。

问：试剂盒推荐用450和540nm双波长检测，但条件有限可否换成450和620的双波长？如何使用校准波长？还有，用空白孔校准可以么？

答：可以的，TMB底物显色后，吸光峰值在450nm，另外的校准波长是防止气泡等杂质造成的干扰设置，避开450左右50nm以上即可。两次读取的OD值，用OD450 - OD校准波长即可。尽量还是建议有条件的选用双波长校准的方法，因为避免了不同孔的读数影响，防止出现空白孔污染，导致读数较高，无法校准的情况。

问：ELISA可以检测胞内蛋白么？

答：可以的，选用支持组织匀浆的ELISA试剂盒即可，将组织样品或细胞样品进行裂解，提取胞内蛋白后进行蛋白定量，保证每孔上样总蛋白量一致即可。

问：ELISA试剂盒显色液是双组份的，有些其他品牌的是单组分的，使用单组分的有影响么？

答：HRP酶标二抗的ELISA试剂盒，显色底物一般为TMB，TMB不稳定，曝光或污染氧化后会出现显色反应，导致实验背景升高，或无法使用，所以爱必信的ELISA试剂盒将显色液调整为双组份，方便稳定保存，仅在使用前混合，避免了TMB的不稳定影响实验结果。如您选用的试剂盒为单组分显色液，在使用前检测是否为无色透明，如果是正常的，对结果也没有影响，可以放心使用。

问：整个过程需要避光吗？避光需要避到什么程度呢？

答：ELISA实验中，在酶标抗体孵育，以及显色底物孵育这两步建议避光，其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹，或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。