DB3.1 Electroporation-Competent Cell

产品规格

DB3.1               50μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                                10μl

保存条件(保质期)：                                         -80℃（6个月）

基因型

F- gyrA462 endA1 glnV44 Δ(sr1-recA) mcrB mrr hsdS20(r_B^-, m_B^-) ara14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Sm^R) xyl5 Δleu mtl1

DB3.1 Electroporation-Competent Cell产品说明

DB3.1大肠杆菌菌株基因组中含有gyrA462基因，赋予其对ccdB毒性基因的抗性，特别适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体 (例GATEWAY System vector)，此菌株具有链霉素抗性。生产的DB3.1电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2×10¹⁰ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的DB3.1电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

    A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；

    B. 对于连接产物，大部分公司的T4连接酶反应体系或50度反应重组体系可与DB3.1电击感受态混合后电击转化，无               需进行DNA纯化，但DNA浓度不能过高，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。

    C. 对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM                   EDTA)重悬，然后与DB3.1电击感受态混合进行电击转化。

3. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温），用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml锥形离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。

6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。