植物吲哚乙酸(IAA)酶联免疫分析试剂盒操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

48pmol/L  5 号标准品  150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

24pmol/L  4 号标准品  150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

12pmol/L  3 号标准品  150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

6pg/ml  2 号标准品  150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

3pg/ml  1 号标准品  150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

植物吲哚乙酸(IAA)酶联免疫分析试剂盒实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。用纯化的植物吲哚乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸（IAA），再与 HRP 标记的吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。用酶标仪在

450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓度。