罗氏荧光定量PCR仪LightCycler480详细介绍

一、适用范围：临床/科研中利用荧光定量PCR方法检测目标基因，对其进行定量或者定性分析或进行基因分型或检测突变，为临床治疗进行指导。
二、荧光定量PCR仪LightCycler 480 II性能总结
作为荧光定量技术的持有者，罗氏公司一直致力于为客户提供性能优秀的定量产品，罗氏LightCycler^® 480（以下简称LC-480）于2005年底面世，2006年开始在中国推广，截至目前，已经在中国各研究及机构销售达1000多台，市场反应热烈！
    LC-480是在总结了目前市场上现有荧光定量的特点后，结合Roche自身的技术优势研发出来，在以下几个方面体现了的技术特色：
1．反应容器及检测通量： 
    96孔，可选配升级为384孔反应模块。用户可自行更换，无需工程师到场。
 5色激发通道：290－800nm， 440，465，498，533，618nm； 6色荧光检测通道： 488，510，588，610，640，660nm，适用多种荧光染料，开放性试剂，客户可根据实际情况选择ROCHE或其他厂家提供的试剂。
2．反应体积： 
96孔板： 10-100μl， 384孔板： 3-20μl，可节省实验成本。
3．温控系统（标准模式 ）：     
样本升温：4.8℃/秒，连续可调
均一性： +/-0.1℃（是板式定量PCR中温度均一性好的产品）
准确性： +/-0.1℃
反应时间：不借助快速试剂，96孔＜60min，384孔＜­­40min
4．光学系统： 
4/1）采用白色固态光源，光强相对于氙灯更强，波长范围为全波长，适用多种荧光染料，开放性试剂，客户可跟据实际情况选择ROCHE或其他厂家提供的试剂。
4/2）激发光经五角反射镜减少光程差，消除光学边缘效应。
4/3）热盖的设计减少孔间光学信号交叉，邻近孔之间大交叉干扰<0.02%。颜色补偿软件及滤光片减少同一孔内的多种荧光染料的信号干扰，实现多重PCR方式。
5．线性范围及检测灵敏度：
定量动态范围可达10⁰－10¹⁰，样品无需稀释，达到单拷贝基因的水平。
6．精确性及重复性：
孔间检测的重复性为CV≤0.15%。可以区分1000与2000拷贝的差异，而且此项会作为装机指标！
7．检测模式:
荧光染料（SYBR Green等）、Taqman 探针、分子信标、 Scorpion，杂交探针、单探针等
8．软件系统革新：
8/1）*的大二阶导数法取Ct值。
8/2）考虑PCR实际扩增效率，而非武断设定为2
8/3）含效率校正的相对定量软件
8/4）高分辨率熔解曲线分析进行基因扫描等

 罗氏荧光定量PCR仪LightCycler480详细介绍 特色功能：

1.HRM分析功能：
高分辨率熔解曲线 （High Resolution Melting, HRM）可以从更细致的程度研究双链DNA的热变性过程，从而获取更多的信息量。HRM做为一种创新、均一、PCR扩增反应后进行的分析方法，可应用于对PCR扩增产物中SNP，基因突变和甲基化等基因变异检测等广泛的研究分析领域,如对食品中病源微生物的快速筛查与检测等。
  凭借LightCycler® 480II系统*的基因扫描软件和配套提供的高分辨率熔解曲线PCR反应即用型体系HRM PCR Master，罗氏诊断应用科学部*提供了基于模块式定量PCR仪上的整合式基因扫描方案。
2. Universal Probe Library通用探针库（＞5000000转录组）
只需要165个预制探针就完成上百万种实时定量PCR实验，对整个转录组进行高效研究。整套探针易于冰箱存储，让您的实时定量PCR检测可灵活自在地进行。
UPL的165个探针选自转录组中高频率出现的8-和9-碱基序列，确保可以覆盖任意的一个转录组的全部转录子。
UPL探针仅8到9个核苷酸长，且含有Locked Nucleic Acids(LNA)。LNA是一类核糖2、4位羟基缩合形成氧桥的核酸类似物，这一特殊构像的核糖能够促进碱基堆积及核糖预组织效应从而提高其热稳定性，使仅不到10个核苷酸长度的探针Tm值有显著的提高，方便进行水解探针法的定量检测。并且，含有LNA的UPL探针能够辨别其他核酸探针无法区分的单碱基错配，从而轻松保证您基因表达检测的专一性要求。
3. RealTime ready 预制检测板
这一系列的预制探针组合是用于多种qPCR检测的即用预制微孔板，可直接用于检测大量特定信号通路、代谢途径或特定功能相关的基因表达情况。为方便使用，已预装于LightCycler® 96-/384-孔板中，每一平板都含有目标特异的引物以及Universal Probe Library探针。您所需添加的只有预混酶液、水以及样本cDNA，就可以获得类似于微流体芯片的分析功能，整个过程更加直观、简便。如果您有已知需要检测的基因，罗氏还支持为您在线定制专属的预制检测板，大化地节省您宝贵的时间。
除了信号通路、代谢途径或特定功能相关的目标基因，每一预制平板上也包含了逆转录产物特异的对照以及内参基因用于简化分析实验数据。