1. 亮发光杆菌和培养基从稳定运行的生物脱硫脱氮 EGSB-DSR 反应器的不同高度采集污泥。将采集的样品 50 mL (固体 5.0 g)放入 500 mL 灭菌的锥形瓶中，加入无菌水稀释到 250 mL，放入玻璃珠 20−25 个，在摇床中以 220 r/min 振荡 24 h。将菌胶团或土壤颗粒振碎，制成菌悬液。采用 Hungate 厌氧滚管技术筛选功能微生物，培养基的配方(g/L)：Na2S·9H2O 0.50，无水乙酸钠 0.28，NaHCO3 1.50，NH4Cl 0.05， KNO3 0.15， K2HPO4 0.05。采用 4 mol/L NaOH 将 pH 调至 7.5。在配制培养基过程中全程采用80%氮气吹脱以保证厌氧环境。制作固体培养基时，在液体培养基中加入 2%左右的琼脂。

2. 菌种的分离与筛选吸取 1 mL 的污泥菌悬液，用无菌水稀释至 10–4。接入固体培养基中在恒温培养箱 30 ºC 培养 5 d 至培养基上出现单菌落为止。挑取培养基上的单菌落转入液态分离培养基，进行扩大培养，在恒温培养箱 30 ºC 培养，培养周期为 5 d 左右，培养基出现白色混浊为宜。用接种针粘取液态培养基的菌种，在固态培养基上进行平板划线培养。在恒温培养箱 30 ºC 进行培养，然后挑取单菌落转入液态培养基中。重复以上分离步骤 5 个周期，直至分离出单一菌落。

3. 菌株 A2 形态特征以及 16S rRNA 基因的测序鉴定采用透射电镜的方法观察菌株的形态特征：取纯化的液体培养物一滴置于铜网上，15−20 min 后取铜网于 2%的磷钨酸钠溶液中负染色 40 s，取出铜网置于干燥的滤纸上划线分区，晾干。将此铜网置于透射电镜的样品室，观察细菌形貌。之后进行革兰氏染色实验。采用天根公司的细菌基因组提取试剂盒提取菌株 A2 的细菌基因组 DNA，然后用正向引物 F8 (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′) 和反向引物 R1492 (5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)进行细菌的 16S rRNA PCR 扩增，反应体系(50 μL)：模板 DNA 3 μL，正向引物(20 pmol/L) 2 μL，反向引物(20 pmol/L) 2 μL，dNTP mixture (1.95 mmol/L) 2.5 μL，Taq DNA 聚合酶(5 U/μL) 1.5 μL，10×Buffer 3 μL，ddH2O 36 μL。 PCR 扩增条件：95 °C 5 min；94 °C 1 min，60 °C 30 s， 72 °C 1 min，35 个循环；72 °C 10 min；4 °C 保存。将 PCR 扩增的产物进行测序，测序结果在 NCBI 数据库中比对分析，并用软件 Mega 5.0 进行系统进化分析。

4. 菌株 A2 的异养反硝化脱硫特性将亮发光杆菌对数期的菌液 10 mL 转接入配制好的液体培养基 50 mL 中，立即用离子色谱和分光光度计检测 S2–、S2O3 2–、SO4 2–、NO3 – 、NO2 – 和碳源浓度并记录，再按原筛选的条件进行培养。每隔 3 h 检测一次，直至这 6 个指标的浓度不再变化。
Gambogic acid    藤黄酸    2752-65-0    20mg

Leucoside    堪非醇3-O-桑布双糖苷    27661-51-4    20mg
Scularin    野黄芩苷    27740-01-8    20mg
Geniposidic acid    京尼平苷酸    27741-01-1    20mg
Isosteviol    异甜菊醇    27975-19-5    20mg
Cimigenoside    升麻环氧醇苷    27994-11-2    20mg
亮发光杆菌