人血管平滑肌细胞的培养步骤：

　　1）复苏细胞：将细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

 

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

 

　　人血管平滑肌细胞的实验方法：

　　1、分离与培养：麻醉后取胸主动脉及腹主动脉，将血管组织剪成小块培养于含有10%血清的DMEM低糖培养基中。待细胞生长至融合后采用胰酶消化传代，采用细胞进行实验。

 

　　2、增殖实验：将细胞接种至96孔板，待细胞贴壁后换用无血清的DMEM低糖培养基饥饿24h。采用细胞计数试剂盒测定的吸光度值，以各组吸光度值与初始吸光度的比值作为各组的相对细胞活力，并以此绘制细胞增殖曲线。

 

　　3、划痕实验：将细胞接种于12孔板，待细胞生长融合时换用无血清DMEM低糖培养基饥饿24h，采用无菌吸头划痕并采用PBS冲洗2次。换用条件培养基孵育24h，并拍照观察。每组随机取5个视野，计数迁移细胞的数目，以此判断细胞的迁移活性。