心肌细胞的原代培养
时间:2024-03-05 阅读:1141
1. 准备0-1天内的SD大鼠新生鼠。
2. 用温的无菌去离子水,轻轻擦拭每只新生鼠。
3. 用70%的乙醇去除新生鼠身体上的污染物。
4. 断头,取心脏,心脏置于冰的PBSG溶液中。
5. 除去血液和非心脏组织。
6. 剪碎心脏组织。
7. 加入胰酶-胶原酶消化液,每只新生鼠75ul。
8. 在37°C的摇床培养箱中,以250 rpm/ 5 min,消化心肌组织。
9. 轻轻涡旋,然后离心10秒,丢弃第一次消化的上清液。
10. 开始第二次消化,250 rpm/ 5 min后,轻轻涡旋,然后离心10秒,收集含心肌细胞的上清液到2倍体积的马血清中。
11. 重复上述心肌细胞的消化过程,共进行10次消化,收集心肌细胞悬液。
12. 使用没有包被的10cm大皿,预种植心肌细胞1h。
13. 在1h后,收集没有贴壁的心肌细胞,200g/10min 离心,
14. 重悬心肌细胞于DMEM培养基中,种植在包被过的培养皿中。