斑马鱼多巴胺（DA）ELISA 技术试剂盒技术原理

极威生物 GIVEI® ELISA 试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 （ELISA）。往预先包被斑马鱼多巴胺（DA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入 标本、标准品、HRP 标记的技术抗体，经过温育并*洗涤。用底物 TMB 显色， TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的斑马鱼多巴胺（DA）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下 测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 

斑马鱼多巴胺（DA）ELISA 技术试剂盒样品收集、处理及保存方法 

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集 血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。 

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。 

5. 保存：如果样本收集后不及时技术，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免 反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 

试验所需自备试验器材 (不提供，但可协助购买) 

1. 酶标仪(450nm 波长滤光片) 

2. 进口品牌高精度加液器及一次性吸头：0.5-10ul, 2-20ul, 20-200ul, 200-1000ul。 

3. 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水，坐标纸等。可协助代购相关产品，请咨询。

本产品仅供科研，不得用于其他用途 

操作注意事项 

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 60 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会 有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。样本在使用前 也要在室温平衡 60 分钟。 

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 

3. 预处理后的样本无需稀释，直接取 10μL 加样即可。 

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 

试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液 加 19 份的蒸馏水。 

注意事项 

1. 试剂盒使用前请保存在 2-8 ℃。复溶后的标准品若未用完，请废弃。 

2. 浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使 液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或 1000 转/分离心 1 分钟，以 使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前， 请用移液器小心吹打 4-5 次使 溶液混匀。 

3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象，微加热至 40℃使结 晶*溶解后再配制洗涤液。（加热温度不要超过 50 ℃） 使用时洗涤液应为 室温。

4. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）。请提前咨询 极威生物科技有限公司。 

5. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用zui低频率)， 如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 

6. 在试验中标准品和样本技术时建议作双孔技术。 

7. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之间混用！否 则将影响试验结果。

8. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是技术血液或者其他 体液标本时，请按国家生物试验室安全防护条列执行。 9. 如果分次使用，请根据需要量配制各组分，以免配制过多造成浪费而影响后 续试验。剩余板孔请用封板胶纸封住，放回铝箔袋中,2 个月内用完。

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