主要用途 

细胞 P300/CBP 组蛋白乙酰转移酶（P300/CBP-HAT）活性荧光定量技术试剂是一种旨在通过通用底物 H3 多肽，在敏感性抑制剂存在与否的情况下，通过 P300/CBP 的作用，将乙酰辅酶 A 上的乙酰基团，转移到 多肽分子上的过程中，释放出巯基辅酶 A，进而使用巯基荧光探针，产生高度荧光产物，即采用荧光法来 测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权wei而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适 用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或*纯化酶样品中 P300/CBP HAT 的特 异活性技术，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。 

技术背景 

核小体（nucleosome）是染色质的最小结构单位，由组蛋白H2A-H2B双体和H3-H4双体构成的组蛋白八体 结构（octamer），外层涵盖146碱基DNA。其结构中组蛋白N末端为游离状态，且高度进化保留，在特定氨 基酸部位发生诸如甲基化、乙酰化、磷酸化修饰，以改变其电荷和功能。组蛋白上特定赖氨酸残基的ε氨基 基团的乙酰化通过组蛋白乙酰转移酶（Histone Acetyltransferase；HAT；EC2.3.1.48）催化产生，具有表观 遗传学的调节作用，达到染色体重构（remodeling），染色质松弛打开，促使基因转录。其功能异常将导致 肿瘤、神经退行性疾病、AIDS和炎症。组蛋白乙酰转移酶，又称为赖氨酸乙酰转移酶（lysine acetyltransferase）；KAT），分成二型，细胞核内的A型，包括P300/CBP、Gcn5、TAFII250等，和细胞浆内 的B型，例如Hat1。其又分成六类：P300/CBP（P300/cAMP Responsive Element-Binding Protein），包括P300、 CBP等；GNAT（Gcn5-related N-acetyltransferase），包括Gcn5、PCAF、Hat1、Elp3、Hpa2、Hpa3、ATF-2、 Nut1等；MYST（MOZ、ybf2/sas3、sas2、Tip60），还包括Esa1、MOF、MORF、HBO1等；核受体共激活 因子（nuclear receptor co-activator），包括SRC-1、SRC-3、ACTR、TIF2；TAFII250（TATA box binding protein associated factor）；TFIIIC（transcriptional factor IIIC）等。其中P300/CBP家属中包括P300、CBP、和P300/CBP 相关因子（P300/CBPAssociated Factor；PCAF），这是第一个发现的组蛋白乙酰转移酶，成为结构、机制和 功能研究的代表。P300（又称为KAT3B），E1A肿瘤结合蛋白和CBP（又称为KAT3A），cAMP反应元素结 合蛋白（cAMP Responsive Element-Binding Protein；CREB）是全面性转录共激活因子（global transcription coactivator），位于核内，属于旁系同源（paralogue）蛋白，功能相等，序列相似，相同的结构域（包括核 受体结合结构域、锌指（zinc finger）结构域、溴区结构域（bromodomain）、内部大乙酰转移酶结构域等）， 具有内生性乙酰转移酶活性，乙酰化组蛋白和非组蛋白，与300多个DNA结合性转录因子、病毒转化因子、 核受体、信号分子等反应、其功能在于调节细胞周期和细胞分化、控制细胞生长和凋亡、整合多种转录水 平信号依赖性通路（例如G蛋白通路）、修正基因表达、DNA修复和复制、蛋白间反应和蛋白稳定性，作用 于胚胎发育尤其是器官生成，以及调节造血干细胞、神经突触活性和长期记忆形成等。P300和CBP异常， 会导致肿瘤发生和发展、糖尿病、哮喘、髓细胞白血病（myeloid cell leukemia）、阔拇指巨趾综合征 （Rubinstein-Taybi syndrome）。基于底物H3组蛋白多肽Ac-Gln-Thr-Ala-Arg-Lys-Ser-Thr-Gly-Gly-Lys-Ala- Pro-Arg-Lys-Gln-Leu-Ala-Thr- Lys-NH2（H3组蛋白N末端5至23氨基酸残基），在P300/CBP敏感性抑制剂C646 存在与否的情况下，通过P300/CBP的作用，将乙酰辅酶A上的乙酰基团，转移到多肽分子上，由此产生乙 酰化多肽和巯基辅酶A（CoA-SH），终止反应后，与巯基荧光探针7-二乙基胺基马来酰亚胺苯基甲基香豆su（7-diethylamino-3-（4-maleimidylphenyl）-methylcoumarin；CPM）反应，产生高度荧光产物，在荧光分光 光度仪下技术（激发波长360-390nm，散发波长450-470nm），来定量测定P300/CBP组蛋白乙酰转移酶的特 异活性。

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