小鼠游离胆固醇（FC）ELISA 技术试剂盒

　　试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠游离胆固醇（FC）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的技术抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠游离胆固醇（FC）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

　　1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5.保存：如果样本收集后不及时技术，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　自备物品

　　1.酶标仪（450nm）

　　2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒温箱

　　小鼠游离胆固醇（FC）ELISA技术试剂盒

　　操作注意事项

　　1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。

　　2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

　　3.预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

　　4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

　　5.所有液体组分使用前充分摇匀。

　　试剂盒组成

　　名称96孔配置48孔配置备注

　　微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

　　标准品0.3mL0.3mL无

　　样本稀释液6mL3mL无

　　技术抗体-HRP10mL5mL无

　　20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

　　底物A6mL3mL无

　　底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无

　　封板膜2张2张无

　　说明书1份1份无

　　自封袋1个1个无

　　注：标准品浓度依次为：2000、1000、500、250、125、0μmol/L.

　　试剂的准备

　　20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

　　洗板方法

　　1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

　　2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

　　小鼠游离胆固醇（FC）ELISA 技术试剂盒操作步骤

　　1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

　　3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

　　4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的技术抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

　　5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　结果判断

　　绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

　　试剂盒性能

　　1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

　　2.灵敏度：技术浓度小于10μmol/L。

　　3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

　　4.重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。

　　5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

　　6.有效期：6个月

　　免责声明

　　1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

　　2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

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