极威生物HPLC技术平台项目2022介绍

高效液相色谱（High-performance liquid chromatography, HPLC） 是一种色谱分析技术，依赖于泵加压后色谱柱中填充物对于样品中各组分吸附力的不同，从而实现各组分快速的分离。

色谱法的分离原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。又因分析速度快而称为高速液相色谱法（High Speed Liquid Chromatography，HSLP）。也称现代液相色谱。

HPLC可以实现绝大部分物质的分离鉴定。液相色谱的诞生，源于气相色谱对于高沸点有机物分析，如蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质的局限性。自1980年代，随着适用于分离蛋白质和其它生物大分子的色谱柱进入市场以来，HPLC开拓了它在生物化学的应用领域。HPLC是目前应用*的分析技术，质谱作为分离技术与HPLC竞争的同时又可以在多方面互补使用，如LC-MS。极威技术平台使用高效液相色谱的方法，可实现对样品进行鉴定，可高效、精准的进行定量分析。

HPLC分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质，表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同，从而实现分离。

极威生物HPLC技术平台项目2022介绍

(1)紫外可见分光技术器(UVD)。

(2)双光路双流路紫外/荧光技术器(UV/FLD-1)。
(3)蒸发光散射技术器(ELSD)。
(4)液相色谱-液相色谱联用(HPLC-HPLC)。

高效液相色谱法的特点和优点

HPLC有以下特点：

高压——压力可达150～300Kg/cm 2。色谱柱每米降压为75Kg/cm 2以上。

高速——流速为0.1～10.0 ml/min。

高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度——紫外技术器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快——通常分析一个样品在15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成。

分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高——紫外技术器可达0.01ng，荧光和电化学技术器可达0.1pg。

柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

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