实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：

    1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性*，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。

    2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，二手定量PCR仪是一种采用外标准曲线定量的方法。

    外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的二手定量PCR仪是迄今为止定量zui准确，重现性的定量方法，已得到*的*，二手定量PCR仪广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。