产品英文名：TAKARA RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)，FN CH-296

产品中文名：TAKARA RetroNectin®重组人纤维蛋白片段，FN CH-296

RetroNectin® 重组人纤维蛋白片段

RetroNectin^®是在大肠杆菌中产生的重组人纤维蛋白片段FN CH-296。 当包被在培养瓶和培养板表面时，RetroNectin^®能显著增强逆转录病毒介导的基因转移到哺乳动物细胞中。

RetroNectin^®重组人纤维蛋白片段和激发型CD3单抗可分别与T淋巴细胞上的VLA和TCR结合，两者共同作用激活酪-氨酸激酶pp125FAK，通过Ras途径刺激T细胞的增殖和分化，使其获得上千倍的增殖。

组份

RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 0.5 mg (Cat. #T100A)

RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) 2.5 mg (Cat. #T100B)

RetroNectin is provided as a sterile 1 mg/ml solution.

[Form]　Sterile solution containing 12.5 mM sodium citrate (pH 6.2) and 1.25% sucrose

储存

-20℃

Caution: Freezing and thawing can be repeated up to 10 times

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RetroNectin原理

RetroNectin是重组人纤维蛋白片段FN CH-296，包括细胞结合域，肝磷脂结合域和CS1位点三个功能区域。它由574个氨基酸组成，分子量63 kDa。RetroNectin能够大幅地提高逆转录病毒感染哺乳动物细胞的感染效率，其作用原理是：细胞表面VLA-4及VLA-5可分别与RetroNectin上的CS-1位点及细胞结合域结合，逆转录病毒载体可以与肝磷脂结合域结合。在经RetroNectin包被的培养容器表面，细胞与病毒载体以高浓度共存，从而提高基因转染效率。RetroNectin^®重组人纤维蛋白片段和激发型CD3单抗可分别与T淋巴细胞上的VLA和TCR结合，两者共同作用激活酪-氨-酸激酶pp125FAK，通过Ras途径刺激T细胞的增殖和分化，使其获得上千倍的增殖。

RetroNectin逆转录技术操作流程

RetroNectin技术可以显著提高逆转录病毒的转染效率，这一发现克服了向造血干细胞中导入基因的困难。现在，RetroNectin技术已成为使用逆转录病毒进行转染操作的常规选择，其操作流程大致如下：

1. 注射用水或灭菌蒸馏水充分溶解RetroNectin，调节浓度至1mg/ml。

2. 0.22 μm滤膜过滤RetroNectin溶液，分装后-20 ℃保存。

3. 用缓冲液将RetroNectin溶液稀释至20～100 μg/ml。

4. 将RetroNectin稀释液加入24孔板，每孔0.5 ml (建议用PBS缓冲液稀释RetroNectin后包被Non-Tissue Cluture Treated plate。

5. 室温放置4小时或4 ℃，避光，过夜。

6. 吸出RetroNectin溶液，每孔加入PBS终止液0.5 ml。

7. 室温放置30分钟。

8. 加入适量PBS清洗孔板。

9. 吸出清洗液，得到RetroNectin包被的孔板 (如果暂不使用，可以在孔中加入适量PBS，用胶膜将平板盖密封，避免RetroNectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前将PBS吸出) 。

10. 逆转录病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。

11. 将病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。

12. 32 ℃放置4小时。

13. 吸出病毒保存液。

14. 每孔加入待转染的细胞悬液400 μl (通常细胞浓度为1 × 105/ml) 。

RetroNectin增强T细胞扩增技术流程

T-cell expansion protocol using RetroNectin reagent, GT-T551 T-cell medium, CultiLife bags, and anti-CD3 mAb.

1.  RetroNectin和CD3单克隆抗体包被培养袋。

2.  同时，来自PBMC的T细胞用GT-T551培养基+IL-2+血浆培养。

3. 第4天，T细胞转移到培养袋，继续用GT-T551培养基+IL-2+血浆培养。

4. 第7天，添加更多GT-T551培养基+IL-2。

5. 第10天，分装两个培养袋，添加更多GT-T551培养基+IL-2。

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