提到蛋白提取，大家不约而同会想到RIPA裂解液，裂解液加入样品中，离心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我们真的用对了吗？RIPA裂解液是从动物细胞或组织中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污剂（表面活性剂）裂解细胞膜和核膜，从而获取细胞和组织中的RIPA可溶性蛋白。

RIPA裂解液的选择

RIPA裂解液中主要包含去污剂，缓冲体系，等渗体系，变性剂、稳定剂等。其中去污剂是细胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基团和极性亲水头端基团组成的两性分子，它们能够降低水的表面张力，所以也被称为表面活性剂，起到破坏脂质双分子层、破裂细胞以及溶解蛋白等作用。

去污剂的类型

不同类型的去污剂对样品的裂解效率有所不同，RIPA裂解液有多种配方，通常会使用不同类型的去污剂组合和不同的去污剂浓度，故不同配方的RIPA裂解液能溶解出的蛋白量和蛋白种类会有较大差异，获得的蛋白图谱会有所不同，从而导致后续实验的检测结果也会产生差异结果。需要根据实验样品和下游实验尝试选择合适的RIPA裂解液配方。

使用ripa裂解液的注意事项

 • 由于多数RIPA裂解液裂解强度较为温和，对胞质中的可溶性蛋白和部分高表达于细胞膜、细胞核上的蛋白提取较为有效，故RIPA裂解液适于这类蛋白的提取，推荐用于WB实验中的定性检测。

 • RIPA裂解液提取蛋白时，经离心后会产生两个组分即RIPA可溶组分（上清）和RIPA不可溶组分（白色沉淀），属正常情况。尽量避开沉淀吸取上清用于下游实验。

 • 如样品加入RIPA裂解液后出现较为黏稠状态，说明样品裂解过于充分，无法去除核酸残团的情况下，需要使用强度更低的裂解液配方，增加超声处理或更换总蛋白提取试剂盒（李记生物Cat：AP01L204），柱式法可以利用离心柱将核酸残团进行截留解决样品黏稠问题，无不可溶组分，可获得更完整的蛋白图谱。

 • 使用RIPA裂解液提取组织样品时，由于组织样品差异较大，从不同样品中高效提取组织蛋白具有挑战性，例如纤维组织和胶原组织（如心脏和肾脏）和软组织（如脾脏和肝脏）需要采用不同的研磨方案匹配，才能获得较佳结果。

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