小麦胚芽凝集素，AF647标记

产品描述

小麦胚芽凝集素， AF647标记（下文简称“AF647 WAG”）， 是一种与N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸结合的凝集素，可能是明亮和绿色荧光中最亮的WGA缀合物。它是目前研究多、应用广泛的一类凝集素。由于WGA与糖缀合物结合，其衍生物和缀合物被广泛用于标记细胞膜和纤维化瘢痕组织，用于荧光成像和分析。WGA的糖结合特异性与β-1,4-GlcNAc-连接残基的序列，即几丁质酶有关。每个单体包含两个相同的非相互作用的结合位点，它们与3或4β-1,4-GlcNAc单元互补。在所检测的单糖中，只有GlcNAc与WGA结合。甘露聚糖不结合，而GalNAc只能弱结合。WGA与含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重复序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的内部GlcNAc残基具有高亲和力结合。N-乙酰神经氨酸只参与与WGA的低亲和力相互作用。WGA显示了复杂的糖类特异性模式，可用于复杂碳水化合物的结构分析。

技术资料

订购信息

运输与保存

蓝冰运输。-20℃避光防潮保存，有效期12个月。

适用仪器

使用方法

溶液配制

1.         AF647 WAG储备溶液（200X）配制

将 500 µL ddH₂O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的储备溶液。【注】：重新配制的储备溶液可在 4℃ 下短期储存，或在 -20℃ 下长期储存。

2.         AF647 WAG工作溶液（1X）配制

将 5 μL 200X WGA 储备溶液添加到 1 mL HHBS 缓冲液中。【注】：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。活细胞的推荐起始浓度为 5-10 µg/mL。

操作步骤

1.         活细胞染色

(1)       用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

(2)       添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。

(3)       将细胞与AF647 WAG 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 min。

(4)       用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

(5)       使用 FITC 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。

2.         固定细胞染色

(1)       在PBS中使用4％的甲醛固定细胞。【注】：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (ER) 结构染色。

(2)       添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。

(3)       在室温下用AF647 WAG 工作溶液孵育细胞 10-30 min。

(4)       用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

(5)       使用 FITC 滤光片组在荧光显微镜上成像细胞。

图示

图 1. 使用AF647 WAG 以 5 µg/mL的浓度在活细胞（Hela细胞） 染色 30 min，然后用 Hoechst 33342（Cat# AC12L021）染色。最后使用带Cy5和DAPI 滤光片组的荧光显微镜成像。

注意事项

1.     本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

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