原理：

实时荧光定量PCR技术（Real-time PCR）借助于荧光信号的变化实时检测PCR产物，一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确确定CT值，通过CT值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

流程：

1、设计合成引物

2、RNA 抽提及检测

3、cDNA制备

4、标准曲线制备

5、Real-time PCR扩增

6、数据分析

实验要求：

1.客户需自备引物，亦可委托本公司设计合成。

2.标本尽可能新鲜；标本量：组织块≥150mg；细胞数≥1×107。

3.实验室不接受RNA样品，或者客户有证据证明样品不存在污染和讲解。

标本收集及注意事项：

血液样本：

用抗凝管收集4-5ml的新鲜血样，加入淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，加入trizol或者直接冻存到-80度或者液氮中

细胞：

1、悬浮细胞：低速离心，收集细胞。保存同上

2、贴壁细胞：胰酶消化或者细胞刮刀，然后离心，收集细胞。保存同上

组织：

离体时间尽量不超过15分钟，用锡箔纸包埋或者放入冻存管中，先放入液氮中速冻几个小时或者过夜，再放入-80度冰箱或液氮保存