小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α抗体的生wu素化标记实验要点
时间:2022-03-24 阅读:152
小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α抗体的生wu素化标记实验要点:
1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
Phospho-Ack1 (Tyr284)磷酸化Ack1抗体
Phospho-Ack1 (Tyr326)磷酸化Ack1抗体
Phospho-beta-Arrestin 1 (Ser412)磷酸化β抑制蛋白1抗体
Phospho-Aurora A (Thr288)磷酸化有丝分裂激酶A抗体
phospho-APS(Ser598)磷酸化APS抗体
Aurora A有丝分裂激酶A抗体
AIM2干扰素诱导蛋白AIM2抗体
Aquaporine 2水通道蛋白-2抗体
ABI2肿瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶结合蛋白抗体
ARL11ADP核糖基化因子样11抗体
ARMCX3ARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体
ARMCX1ARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体
ARMCX2ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体
Apg10自噬相关蛋白10抗体
Aminoacylase 1氨基酰化酶1抗体
Adipose Triglyceride Lipase脂肪甘油三酯脂酶抗体
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172)磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
Amphiregulin双调蛋白(结肠直肠细胞源性生长因子)抗体
phospho-AQP2(Ser264)磷酸化水通道蛋白2抗体
AXL粘附相关激酶抗体
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)磷酸化粘附相关激酶抗体
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305)磷酸化蛋白激酶B抗体