丙酸蛛网菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验操作
时间:2022-03-29 阅读:150
丙酸蛛网菌探针法荧光定量PCR试剂盒实验操作:
1. 模板制备(样本制备区)
建议使用配套水生动物病害基因组 DNA/RNA 提取试剂盒系列产品,具体过程详见产品说明书。
2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒中进行)
请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月
取出所需测试数的已含有反应液 A-TSV-I 的 PCR 管,将试剂*解冻,离心 30 秒,在管盖上标记管名(阴性对照管 NG、样品 XX、阳性对照管 PG)。打开管盖向各管管底分别加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I,盖上阴性对照管管盖,其他各管分别沿管壁加入 2μL 模板,顺序为待测样品模板、PG-TSV-I,依次盖好各管管盖,离心 30 秒,立即进行扩增反应。
3. 扩增反应(扩增及产物分析区)
①恒温仪器 63℃条件下反应 60 min。待仪器升温至 63℃后,新建程序,设置实验名称及反应时间,将步骤 2中离心后的 PCR 反应管放入恒温荧光分子检测仪,点击开始检测。
②若使用荧光定量 PCR 仪,则荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 None,将 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作为一个循环,于 63℃ 45 s 处收集荧光信号,60 个循环。其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
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