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实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
| 小鼠视网膜Muller细胞 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 | GOY-01X1057 |
商品介绍：
名称 小鼠视网膜Muller细胞 2.组织来源：视网膜组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 小鼠视网膜Muller细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。第一神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处最多。第二层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力*。视网膜Muller细胞作为视网膜中的主要胶质细胞，大约占视网膜胶质细胞的90%，因而在视网膜疾病中起着何种作用也受到越来越多的关注。在超微结构水平上，Muller细胞的胞质似乎比临近的其他细胞更高的电子密度，更发达的内质网，细胞核是典型的卵圆形或多角形。但在不同物种中或同一物种中的不同部位，Muller细胞形态也会有所差异的。视网膜Muller细胞是一种特化的神经胶质细胞，不仅具有维持视网膜的正常结构和功能的作用，并调制视网膜神经元活动，还能参与多种病理过程，尤其是眼底增殖性病变，如增生性玻璃体视网膜病变、增生性糖尿病视网膜病变等，体外培养Muller细胞是研究这些增殖性病变途径之一。 5.方法简介： 实验室分离的小鼠视网膜Muller细胞采用胶原酶消化法和胰蛋白酶反复消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： 实验室分离的小鼠视网膜Muller细胞经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M117 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态梭形、多角形 传代特性可传3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
大鼠 EFNB2 基因全长ORF克隆
大鼠 EFNB1 基因全长ORF克隆
大鼠 EFNA5 基因全长ORF克隆
大鼠 FIGF 基因全长ORF克隆
大鼠 VEGFC 基因全长ORF克隆
大鼠 FLT1 基因全长ORF克隆
大鼠 EGFR 基因全长ORF克隆
大鼠 INSR 基因全长ORF克隆
大鼠 TFRC 基因全长ORF克隆
大肠杆 (Shiga toxin) STX2 基因全长ORF克隆
小鼠视网膜Muller细胞0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prion-like protein doppel
大肠杆菌显色培养基 英文名称：E.Coli Chromogenic Medium 产品规格：1000(ML)
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Prosalusin
62.5-4000 pg/mL 人绒毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA试剂盒
15.6-1000 pg/mL 人C-C模体趋化因子26(C-C motif hemokine26)ELISA试剂盒
0.47-30 ng/mL ELISA Kit for Human EF-hand domain-containing protein D2
0.312-20 ng/mL 人多聚腺苷二核糖聚合2(PARP-2)ELISA试剂盒
乳酸杆菌选择性培养基 英文名称：LBS Agar 产品规格：250g
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Arginase-1
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human High affinity copper uptake protein 1
