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超低分子量蛋白质Marker(3.3-20.1kD)使用说明书
货号:MP1003
规格:15T
保存:-20℃保存,有效期为一年。
产品简介:
本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3. 3kD-20. 1kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉,每种蛋白含量约为15-22.5μg,配有一支1×上样缓冲液。
使用说明:
1、 开封后,溶于150 μL 1×上样缓冲液,于95℃水浴5分钟,可根据需要进行小量分装,每管10μL,-20℃贮存,每次取一管使用,避免反复冻融。
2、 使用前取分装后的小管室温融化后,95℃预热5分钟即可上样电泳,用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图) 。
凝胶的配置方法:
分离胶 | 夹层胶 | 浓缩胶 | |||
20%/4.5mL | 16.5%/4.5mL | 15.5%/4.5mL | 10%/2mL | 4%/2mL | |
49.5%T 3%C | / | / | / | 0.407mL | 0.160mL |
49.5%T 6%C | 1.82mL | 1.50mL | 1.395mL | / | / |
凝胶缓冲液 | 1.50mL | 1.50mL | 1.50mL | 0.667mL | 0.496mL |
甘油 | 0.48mL | 0.48mL | 0.48mL | / | / |
ddH2O | 0.70mL | 1.02mL | 1.125mL | 0.926mL | 1.344mL |
10%APS | 40µL | 40µL | 40µL | 20μL | 20μL |
TEMED | 5µL | 5µL | 5µL | 3µL | 3µL |
凝胶制备及染色注意事项:
1、 先配制分离胶,聚合后再配制夹层胶,后配制浓缩胶,3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时,30v跑1-2小时后,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至100v,至电泳结束,整个电泳过程大约需要6-8小时。
5、 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如时间不允许,也可不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(货号:P1300),该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。
附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1、 49.5% T 3 % C (配制夹层胶和浓缩胶)
丙烯酰胺 48g
甲叉双丙烯酰胺 1.5g
用ddH20溶解后定容至100mL
2、49. 5 % T 6 % C (配制分离胶)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉双丙烯酰胺 3. 0g
用ddH20溶解后定容至100mL
3、凝胶缓冲液
Tris碱 182g
ddH20 300mL
用HCl调节pH值至8.45
用ddH20定容至 500mL
再加入SDS 1.5g
4 、10×阳极缓冲液(下槽缓冲液〕
Tris碱 121. 1 g
ddH20 400mL
用HCl调pH值至8.9
用ddH20定容至 500mL
5、阴极缓冲液(上槽缓冲液)
Tris碱 12 .11g
Tricine 17.92g
SDS 1g
用ddH2O定容至1000mL
此溶液不用调节pH值
6、固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH20定容至100mL
7、染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考马斯亮蓝G-250
用ddH20定容至500mL
MP1003 超低分子量蛋白质Marker(3.3-20.1kDa) 15T