产品简介：

三一造血人间充质干细胞高效扩增试剂盒（CT-021）适用于在体外培养人脐带、脂肪、牙髓等多种组织来源的间充质干细胞。

产品特点：

· 无异源成份

· 细胞可稳定传代至第16代

· 无菌，无支原体，低内毒素

· 可支持人脐带，脂肪，牙髓，骨髓，胎盘来源间充质干细胞的快速增殖

保存条件：

人间充质干细胞基础培养基与培养基添加剂 B 需 2-8°C 避光保存，有效期为 12 个月；培养基添加剂 A 需-20°C 保存，有效期 24 个月；

配制成的wan全培养基可于 2-8°C 条件下存放 4 周；

使用方法：

一、人间充质干细胞无血清wan全培养基的配制：

1. 于实验开始时前一天，将培养基添加剂 A 从-20°C 冰箱中取出，置于 4°C 冰箱中直至wan全溶解；

2.在将培养基瓶拿进超净台之前，用 75%酒精对其表面进行消毒；

3.将培养基添加剂 A 和 B 加入到人间充质干细胞基础培养基中；

4.吸取基础培养基洗涤瓶身内壁，并重复操作一次，尽可能使培养基添加剂全部加入到基础培养基中；

5.轻轻摇晃基础培养基瓶身，使各成分混合均匀，摇晃时，请避免气泡产生。将配制好的人间充质干细胞无血清wan全培养基置于2-8°C 保存。

二、人间充质干细胞的复苏：

1.准备好 37°C 水浴；

2.超净台中，取5mL 人间充质干细胞无血清wan全培养基于 T25 瓶中，并将培养瓶置于37°C，5% CO2培养箱中孵育30min；

3.超净台中，取10mL人间充质干细胞wan全培养基于15mL离心管中，待用；

4.从液氮中取出冻存的人间充质干细胞，置于-80°C冰箱中挥发管中液氮，而后迅速将冻存管置于

37°C 温水中，并快速晃动冻存管，使其内含物尽快融化，待冻存管内含物融化wan全后取出；

5.在将冻存管拿进超净台之前，用 75%酒精对其表面进行消毒；

6.轻轻重悬细胞，并将其移入待用的装有 10mL 人间充质干细胞wan全培养基的 15mL 离心管里；

7.用 1mL 培养基再次冲洗冻存管，并将此悬液移至离心管中，轻轻吹打混匀；

8.室温下，300g 离心 10min；

9.倾去上清，往沉淀加入 2-3mL 的人间充质干细胞wan全培养基，轻轻吸打均匀；

10.从细胞培养箱中取出已预先孵育 30min 的 T25 瓶，吸去培养瓶中的液体；

11.将细胞按 0.8-1.0×104 个活细胞/cm2 的密度接种到 T25 瓶中，并加入足量的人间充质干细胞无血清wan全培养基，轻轻摇晃培养瓶，使细胞分布均匀；

12.将细胞置于 37°C，5% CO2 的细胞培养箱中培养；

13.第二天，更换新鲜的人间充质干细胞无血清wan全培养基；

14.每隔两天更换一次新鲜的培养基，直至细胞生长至 80-90%的汇合度。

三、人间充质干细胞的传代：

1.将 PBS，胰酶置于 37°C 水浴锅中预热；

2.超净台中，吸去培养瓶中的培养液；

3.轻轻加入5mL PBS于T25 瓶中，轻轻晃动洗涤细胞后吸去PBS，共洗涤两次；

4.加入 2mL 浓度为 0.05%的胰酶，轻轻晃动，使胰酶溶液均匀覆盖培养瓶底面。显微镜下，当70-80%的细胞变圆时轻拍培养瓶，并立即加入10mL人间充质干细胞无血清wan全培养基进行中和。轻轻吸取瓶内液体反复冲洗瓶底，使细胞wan全脱落；

注意：建议使用浓度为 0.05%的胰酶，并且消化时间不宜过长，以减少胰酶对干细胞的损伤。

5.将细胞悬液转移到15mL离心管中，300g离心10min；

6.小心去除上清，而后加入10mLPBS重悬细胞沉淀，并再300g离心10min；

7.小心去除上清，加入2-3mL人间充质干细胞无血清wan全培养基重悬细胞沉淀，按1：2或1：3的比例接种到新的T25瓶中，再次加入足量的wan全培养基，轻轻晃动培养瓶，使细胞分布均匀；

8.将细胞置于 37°C，5% CO2的细胞培养箱中培养。

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