三一造血CIK 细胞高效扩增试剂盒(CT-009)产品介绍
时间:2024-03-12 阅读:534
产品简介:
细胞因子诱导杀伤性细胞(CIK 细胞)是一个异质细胞群,包含 CD3+CD56+NK 样 T 细胞和CD3+CD8+细胞毒性杀伤作用 T 细胞,具有杀伤肿瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特点, CIK 细胞对各种肿瘤尤其是对低表达 MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本试剂盒可以从单个核细胞(MNC)在体外高效扩增成 CIK 细胞,为免疫学研究提供了一个有力工具。
产品特点:
· 成份明确,无异源成份
· 无菌,无支原体,低内毒素
· 同时适用于胶血与外周血
· 14天培养后,细胞活率在90%以上wan全无血清培养,使用更安全
· 杀伤活力强,主要成分为NK样T细胞及细胞毒性T细胞
操作方法:
一、血浆的提取与保存
1.将取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 离心管中,室温下 650g,离心 15min;
2.取上层黄色血浆部分于新的 50mL 离心管中(下层为血液细胞成分,用于后续单个核细胞的提取);
3.将血浆置于 56°C 水浴锅中灭活 30min;
4.血浆灭活完毕后,可见血浆呈现浑浊状,900g,离心 10min;
5.取上清,于 4°C 保存待用。
二、单个核细胞的提取
1.取血浆提取步骤的下层红色细胞沉淀,加入生理盐水或 PBS 至原体积;
2.取 2 支 50mL 离心管,分别加入 15mL 淋巴细胞分离液,并将 1 步骤中的稀释血液分别缓缓铺加到淋巴细胞分离液的上层;
3.室温下,800g 离心 20min(升速 1-5,无闸减速);
4.离心后,离心管中样品由上到下分为 4 层:血浆层-白膜层-人淋巴细胞分离液层-红细胞与粒细胞的沉淀。分别小心吸取白膜层及其以下约一半的液体于新的离心管中,并加入生理盐水或PBS 至 40mL 体积,混匀,300g 离心 10min;
5.弃上清,沉淀再次用 40mL 的生理盐水或 PBS 重悬,300g 离心 10min;
6.弃上清,沉淀用少许 CIK 细胞无血清培养基重悬,合并,取部分细胞悬液计数,备用。
三、单个核细胞接种与补液
1.第0天,配制50mL CIK 细胞wan全培养基:CIK 细胞无血清培养基 45mL,10%已热灭活的自体血浆(5mL),CIK-I 100μL,CIK-II 100μL 以及终浓度为 1000IU/mL 的 IL-2。将制备好的单个核细胞(MNC)按 1.5M cells/mL 的细胞密度接种于 50mL 已配制好的 CIK 细胞wan全培养基中,混合均匀后转移至 T75 瓶中,而后将 T75 瓶转移至 5%二氧化碳培养箱 37°C 培养;
2.第 3 天(3×24h),补加 CIK 细胞无血清培养基 95mL,5%已热灭活的自体血浆(5mL)以及 IL-2(IL-2 终浓度为 1000IU/mL),转入细胞培养袋,此时培养袋含 150mL 培养基;
3.第 5 天,补加 CIK 细胞无血清培养基 150mL,1%已热灭活的自体血浆 1.5mL 以及 IL-2(IL-2终浓度为 1000IU/mL),此时袋子含 300mL 培养液;
4.第 7 天,补加 CIK 细胞无血清培养基 300mL,剩余的所有自体热灭活血浆以及 IL-2(IL-2 终浓度为 1000IU/mL),然后分成两袋,此时每个袋子约含 300mL 培养液;
5.第 9 天,分别往每个培养袋补加 CIK 细胞无血清培养基 300mL 以及 IL-2(IL-2 终浓度为1000IU/mL),此时每个袋子约含 600mL 培养液;
6.第 11 天,分别往每个培养袋补加剩余 CIK 细胞无血清培养基以及 IL-2(IL-2 终浓度为1000IU/mL),此时每个袋子约含 1000mL 培养液;
7.第 13-14 天,收获 CIK 细胞。
产品选购:
货号 | 产品名称 | 规格 |
CT-009 | CIK 细胞高效扩增试剂盒 | 2L/套 |