免疫荧光技术是一种建立在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础之上的先进技术。它基于抗原抗体反应的原理，首先将已知的抗原或抗体标记上荧光标签，然后使用这些荧光标记的抗体（或抗原）作为探针，用来探查细胞或组织中的相应抗原（或抗体）。那么你知道免疫荧光实验的常见问题与注意事项吗？让我们一起来看看吧！

　　一、注意事项：

　　为进行免疫荧光实验，我们需要准备细胞样本，而这些细胞样本有多种来源和处理方式。

　　一种是可以使用直接附着在盖玻片上的贴壁细胞。这类细胞在培养时，只需将盖玻片放入培养皿中，细胞便会在上面黏附并生长。这种方法特别适用于附着性较好的细胞类型，因为可以减少后续漂洗步骤时细胞脱落的风险。

　　另一种选择是使用离心分离后的悬浮细胞，这些细胞需要制备成涂片。此外，还可以从体内组织中获得细胞悬液，然后通过离心制备成涂片，这适用于特定实验需求。

　　在选择细胞准备方式时，需根据具体实验的要求和所使用的细胞类型来决定，以确保最终获得可靠的免疫荧光实验结果。

　　二、常见问题：

　　1、无/弱染色烤片温度过高，推荐56℃-60℃1-2h；一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。

　　2、非特异性背景染色是否灭活内源性过氧化物酶；孵育过程中干片；抗原热修复过度。

　　3、染色过深一抗浓度过高；染色试浓度过高或孵育时间过长；染色剂浓度过高或孵育时间过长。

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