Elabscience谷丙转氨酶(ALT/GPT)活性荧光法测试盒适用于检测动物组织样本及血清(浆)等液体样本中的谷丙转氨酶活性。

谷丙转氨酶(ALT)能够催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸在丙酮酸氧化酶的作用下生成H2O2，在过氧化物酶作用下，将无荧光探针氧化为有荧光的物质，通过测定体系荧光值的增加量，即可计算出 ALT的活性。

试剂准备

① 检测前，所有试剂需平衡至室温。

② 试剂三工作液的配制：

每支试剂三粉剂用1.2 mL试剂一充分溶解，置于冰盒上待用，可-20°C保存7天。

③ 1 mmol/L丙酮酸标准品储备液的配制：

取10μL试剂五加入到990μL试剂一中，配制成1 mmol/L的丙酮酸标准品储备液，临用前现配现用。

④ 50μmol/L丙酮酸标准品溶液的配制：

按照1 mmol/L丙酮酸标准品储配液：试剂一体积比为1：19的比例稀释20倍，即得50μmol/L标准品溶液，按需配制，置于冰盒上待用。

⑤ 反应工作液的配制：

按试剂一：试剂二：试剂三工作液：试剂四体积比为56：4：20：20 的比例混匀，现用现配，避光保存，按需配制。

实验关键点

① 试剂一取用时应倒出部分，再取用，避免试剂污染。

② 样本加入板孔中时应触底加入。

操作步骤

① 标准孔：向酶标板对应的标准孔中加入 20μL 的不同浓度标准品。

测定孔：向酶标板对应的测定孔中加入 20μL 的待测样本。

② 向步骤①各孔中加入 100μL 的反应工作液。

③ 酶标仪上振板 5 s，室温静置 3 min，荧光酶标仪上设置激发光波长 535 nm，发射光波长 587 nm，测定各孔荧光值，记为 F1，然后于室温下避光静置反应 60 min，相同波长条件下测定各孔荧光值，记为 F2，则△F = F2 - F1。

注：标准孔不需要求差值，直接取反应 60 min 后测定的荧光值做标准曲线即可

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