翌圣生物PEI转染试剂之瞬时转染步骤
时间:2024-08-22 阅读:430
细胞瞬时转染是一种常用的实验技术,用于将外源DNA或RNA导入细胞内,以研究基因表达、功能和调控机制。以下是细胞瞬时转染的一般步骤和注意事项。今天让我们一起探讨转染效率低下的原因,以为提高转染效率!
一、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染步骤一
提前一天铺板,并且确保细胞均匀分布,具体铺板技巧,请翻看之前文章,细胞铺板总是铺不均匀?别急,方法来了!转染前将细胞培养至70-80%的密度,以确保细胞处于活跃的生长状态。
二、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染步骤二
转染试剂和质粒准备:根据转染试剂的说明书准备转染试剂和质粒DNA。转染试剂的用量通常根据细胞类型和转染效率来确定,一般为2-10μL/孔(对于24孔板)。质粒DNA的用量通常为0.1-1μg/孔(对于24孔板),具体用量需根据实验目的和转染效率进行优化。
三、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染步骤三
混合转染试剂和质粒:在无菌条件下,将转染试剂和质粒DNA混合在无血清培养基中,质粒和转染试剂混合后需用枪轻轻混匀,轻轻混合后孵育5-30分钟,以形成转染复合物。
四、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染步骤四
转染复合物添加到细胞:将转染复合物添加到细胞培养孔中,轻轻摇动以确保均匀分布。
五、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染步骤五
孵育:将细胞培养板放回培养箱中,孵育一定时间(通常为24-48小时),以便DNA进入细胞并表达。
六、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染步骤六
观察和分析:根据实验目的,可以通过可荧光显微镜下通过荧光观察转染效率或提蛋白跑WB进行验证。
七、翌圣生物PEI转染试剂瞬时转染部分产品列表
货号 | 产品名称 | 规格 |
40816ES02 | 100 mg |
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