细胞冻存是细胞培养中的关键环节，直接影响细胞存活率和活力，关系到后续细胞实验能否按照计划有效地进行。掌握好细胞冻存的小Tips，有助您做好细胞培养式样，让我们一起来看看吧！

一、细胞冻存的基本原则

细胞冻存遵循“慢冻”原则：让细胞在超低温环境中缓慢进入“冬眠”状态，暂时停止其代谢活动。目的是保存细胞样本，方便复苏。

二、细胞冻存的注意事项

1. 温度控制不稳定可能导致细胞存活率降低

二甲基亚砜（DMSO）或甘油常作为冷冻保护剂，保护细胞。DMSO能快速穿透细胞膜进入细胞，降低冰点，延缓冻存过程，同时增加细胞膜的通透性，提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而达到保护细胞的目的。

2. 使用程序降温盒的注意事项

（1）异丙醇的量必须足够，且使用5次后需要更换，以确保冻存效果。而泡沫程序降温盒需要在恢复到室温后使用。对于短期的细胞冻存，可以考虑使用-80℃的超低温冰箱。

（2）尽量选择对数生长期的细胞进行冻存，此时的细胞汇合度应达到80%以上。这样可以大大提高细胞复苏后的存活率。对于娇贵的细胞，我们可以通过适当提高冻存液中血清的比例来保证获得更高的存活率和细胞活力。

（3）细胞冻存密度不能太低，因为在细胞冻存时会损失部分细胞，所以适当提高细胞密度有助于提高细胞复苏存活率。

（4）细胞冻存液需要提前配制。在配制细胞冻存液时（或直接使用商业的细胞冻存液，如wako的无血清细胞冻存液302-14681），由于DMSO溶解在培养基中会释放大量热量，因此细胞冻存液需要提前配制，切忌直接将DMSO加入含有细胞的培养基中，以避免损伤细胞。

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