质粒名称：pHyVec4

质粒规格：2ug

实验步骤:

1)质粒提取

1.10,0001min离心收集1.5-5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中

2.加入100溶液1,振荡至*悬浮

3.加入200溶液2,立即轻柔颠側离心管6次,使菌体充分裂解,随后将离心管冰上放置

3分钟

4.加入150山溶液3,立即温和颠倒离心管数次,冰上放置3分钟,10,00g离心10mins

5.将步骤4的上清转移至新的离心管(尽量去除杂质),加入等体积的苯酚/氖仿/异成醇混

合均匀10,000离心5min

将步骤5的上清转移至新的离心管,加入2倍体积的无水乙醇,室温放置5-1omin,沉

降DNA

7.10000g离心10分钟,弃乙醇,保留沉淀,加入1ml706的乙醇洗涤沉淀,10,000离

心5分钟

8.倒掉乙醇溶液,用吸水纸吸净管壁上的水珠,室温蒸发痕量乙醇

9.加入适量含 Rnase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA

2)质粒鉴定琼脂糖礙胶电泳

灌胶:胶中加入芡光染料〈 SYBR Green)

加样:质粒+上样緩冲液→混匀

电泳

结果观察:UV灯下

pHyVec4实验分析：

裂解细胞中除含有质粒DNA外,还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质,因

用碱裂解法除去杂质

1、防止DNA裂解: Solution1

1)、所含糖增加溶洨黏度,維持渗透压,防止DNA受机械剪切作用降解

2)、所含EDTA抑制酶活性

2、溶解与变性: Solution2

1)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性

100427-200301 盐酸溴己新 含量测定 50mg

100428-200401 美索巴莫 HPLC含量测定 50mg

100429-200401 氨苯蝶啶 HPLC含量测定 50mg

100430-200501 羟甲烟胺 含量测定 100mg

100431- 尿蘘素 50mg

100432-200401 枸橼酸喷妥维林 含量测定 50mg

100433-200301 苯甲酸钠 HPLC含量测定 50mg

100434-200301 烟酸(尼古酸） 含量测定 50mg

100435-200701 硝基呋喃丙烯酰胺(呋喃丙胺杂质A） 检查用 100mg

100437-200601 甲氧沙 含量测定 100mg

100438-200401 对氨基水杨酸异烟(帕司烟肼) UV法溶出度检查 100mg

100439-200301 曲匹布通 含量测定 50mg

100440-200301 曲匹地尔 TCL法检查 50mg

100441-200401 桂美酸 溶出度检查 50mg