微生物菌种步骤如下：

(1) 用 2.5% (体积比) 的戊二醛固定收集的细胞样 0.5 h，与 1.25% (质量体积比)水质琼脂混合；

(2) 将固定的琼脂制成1 mm 的切片，继续固定 0.5 h；

(4) 用超纯水漂洗切片，在 1% (质量体积比)铀酰乙酸溶液中固定 1 h；

(5) 用乙醇和氧化丙烯进行梯度脱水，将琼脂切片植入环氧树脂；

(6) 铀酰乙酸染色后用于电镜观察。

5. 菌株分子生物学鉴定

5.1 基因组 DNA 的提取：采用从生工生物工程 (上海)有限公司购买的小量细菌基因组 DNA 快速提取试剂盒提取该菌株的基因组 DNA。

5.2 PCR 扩增：细菌 16S rRNA 基因的 PCR 扩增。前端引物和后端引物分别为 27F (5′- AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′) 和 1492R (5′- GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)。50.0 μL 扩增体系：10×Taq buffer 5.0 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.0 μL，基因组 DNA 2.0 μL，10.0 μmol/L 前端引物和后端引物各 1.0 μL，rTaq 酶 0.5 μL，ddH2O 39.5 μL。反应条件：94 °C 10 min；94 °C 45 s，55 °C 45 s，72 °C 90 s，共 35 个循环；72 °C 10 min。 1.5.3 16S rRNA 序列分析及系统发育树的构建： PCR 产物进行 B 型小 DNA 片段凝胶电泳。测序工作由北京六合华大基因科技股份有限公司完成。将菌株 CYJN-1 的 16S rRNA 序列采用 NCBI 的 BLAST 软件进行同源性比对，用 ClustalX 1.81 和 MEGA 4.0 软件构建系统发育树。

6. CYJN-1 的生长特性研究

6.1 不同能源物质对 CYJN-1 生长的影响：为了确定 微生物菌种的zui适能源物质，培养基中的硫代硫酸钠被下面的物质代替(g/L)：蛋白胨 1.0，葡萄糖 1.0，酵母提取物 1.0，乳糖 1.0，甘氨酸 1.0，赖氨酸 1.0，单质硫 10.0，Na2SO310.0，DBT (二丙苯噻吩，有机硫模式化合物) 0.01mmol/L。接种量 5%，30 °C、170 r/min 培养 2 d，测定细胞浓度，将细胞浓度换算成菌落形成单位(Colony forming unit，CFU)。

6.2 不同温度和初始pH对CYJN-1生长的影响：适宜的温度和 pH 环境同样是硫细菌生长所必需的条件。微生物胞内酶和胞外酶的稳定性均受温度和 pH 值影响，过高过低直接影响菌种的生存及活力。为了确定细胞生长的zui适温度和 pH，CYJN-1 菌株在不同温度(10、20、30、40、50 °C)和不同初始 pH 值(3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)的培养基中 170 r/min 培养 2 d，测定细胞浓度。

6.3 不同底物浓度对 CYJN-1 生长的影响：向培养基中添加不同浓度的硫代硫酸钠，分别为 5、10 和 20 g/L，调节起始 pH 为 7.0。取 100 mL 培养基置于 250 mL 锥形瓶中，接种 5%的菌液，在 30 °C、 170 r/min 条件下培养，每隔一段时间测定细胞浓度。

7. CYJN-1 脱硫性能的测定本研究采用 Na2S 在空气中的主要氧化产物 Na2S2O3 作为 S 2− 的来源。摇瓶实验中，5%的接种量接种在 100 mL 含硫培养液中，zui适培养条件下每 12 h 测定细胞浓度、S2O3 2− 浓度和 SO4 2− 浓度。

8. CYJN-1 耐盐特性的研究在基础培养基中加入一定比例的 NaCl，形成不同的盐浓度梯度，梯度范围分别为 0、1%、3%、5% 和 7%，在zui适生长条件下测定脱硫菌的生长情况和微生物菌种脱除率。