在瑞典1型糖尿病患者中评价RSR 3 Screen ICA™和2 Screen ICA™筛查试验
时间：2024-02-21 阅读：897
胰岛自身抗体是1型糖尿病(T1D)的特异性血清学标志物，是临床医生确定临床分型、预测胰岛素治疗需求、识别有T1D风险的受试者的重要工具，也是观察性研究(如(TEDDY)[9]、BABYDIAB[10]和TrialNet[11])的终点。TEDDY研究已证实胰岛素自身抗体（IAA）是2岁以下新发T1D儿童相关性最高的抗体，而谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）更多见于2岁以上新发患者[9]。
用于自身抗体联合测定的ELISA特别适用于人群筛选需求，只有在联合检测中结果为阳性的样本才需要进一步检测单项自身抗体，从而减少成本、时间、人力资源和环境影响。RSR公司的3 Screen ICA™用于谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗体IA-2 (IA-2A)和锌转运蛋白8 抗体(ZnT8A)的联合检测，2 Screen ICA™用于GADA和IA-2A的联合检测。这两款产品均参与了糖尿病自身抗体标准化计划(DASP)和国际自身抗体标准化计划(IASP)组织的性能评估。
本研究的主要目的是评估3 Screen ICA™和2 Screen ICA™在瑞典人群样本中的灵敏度和特异性，以期在未来进行筛查研究。此外，该研究还评估了IAA和ICA是否有助于提高灵敏度，以进行了RBA和ELISA法在GADA、IA-2A和ZnT8A检测上的一致性评价。
材料和方法
1. 患者分组：
T1D组：纳入100例瑞典T1D的患者，其中，93例患者在确诊当天进行了血样采集，3例患者在诊断后一天内进行了采样，4例患者的T1D病程时间未知。在该研究组中，50例患者为15岁以下儿童(中位年龄8.8岁;范围2.3 - 14.7;男/女: 27/23=1.17)，50例为青少年和成人(中位年龄16.5岁;范围15.1 -41;男/女: 32/18 = 1.78)。
健康对照组：纳入200名健康对照，包括100名儿童和100名成人。对照组儿童的中位年龄为12.6岁，范围为11.9-13.6，男/女: 50/50=1.00；成人中位年龄42.5岁，范围21 - 65，男/女：59/41=1.44。
2. 检测方法
ELISA:酶联免疫法；RBA：放射免疫法；IF：免疫荧光法
结果
RBAs、ICA-IF和ELISA的结果汇总见表1和表2。3 Screen的灵敏度为93%，特异度为97.5%；2 Screen的灵敏度为91%，特异度为98.5%。93例初筛阳性患者中，多数为多种自身抗体阳性，其中72%(67/93)同时为GADA和IA-2A阳性，57%(53/93)为三种自身抗体(GADA、IA-2A和ZnT8A)阳性。在T1D筛查阴性的7例中，仅有1例呈GADA ELISA单项检测阳性。
在健康对照中，仅有1例(0.5%)存在多种自身抗体(IA-2A和ZnT8A)阳性。
在13例T1D患者和2名健康对照中IAA呈阳性。
表1 100例1型糖尿病患者的胰岛β细胞特异性自身抗体结果
表2 200名健康对照的胰岛β细胞特异性自身抗体结果。
IA-2A RBA的灵敏度为78%。GADA RBA的加入提高了12%灵敏度，将该方法学整体灵敏度提高至90%，而ZnT8A RBA (R/W/Q中的任何一种)的加入使灵敏度进一步提高到 91%。相比之下，添加IAA和ICA-IF结果并没有比使用其他检测方法获得更高的灵敏度(表1)。
2 Screen和3 Screen两种检测方法最一致(Kappa=0.97)。IA-2A RBA和IA-2A ELISA两种检测方法的一致性最好(Kappa=0.96)。
讨论
研究者采用了6种RBA、1种IF和5种ELISA对100名T1D患者和200名健康对照的胰岛β细胞特异性自身抗体进行了检测，结果发现3 Screen方法表现优异，其灵敏度(93%)和特异性(97.5%)最高。2 Screen和3 Screen的检测灵敏度优于任何RBA。
相比于放免法，GADA ELISA拥有更高的检出率(84% vs 77% GADA RBA)，大多数(76%)患者在两种GADA检测方法中均呈阳性，而8例患者仅通过ELISA检测为GADA阳性，1例仅通过GADA RBA检测为GADA阳性。
相比于放免法(61%)，ZnT8A ELISA (ZnT8R和ZnT8W变体)可在更多(75%)T1D患者中检测出阳性。IA-2A ELISA和RBA鉴定出相同数量(78%)的阳性患者。
3 Screen适用于人群筛查。除免疫项目常用的血清样本外，经Ca2+处理的EDTA血浆也可以得到可靠的结果[24,25]。在样品中加入血红蛋白、生物素、脂肪乳剂或胆红素对结果没有显著影响，这表明该检测不容易受到这些物质的干扰。
综上所述，本研究显示了3 Screen优异的性能，具有较高的检测灵敏度和特异性，可用于健康人群中对三种自身抗体（GADA、IA-2A和ZnT8A）的初步筛查。在3 Screen筛查阳性的情况下，需进一步对抗体进行单项检测，以识别具有进展为T1D高风险的多重自身抗体阳性患者。经3 Screen筛查试验阴性的样本通常不需要进一步检测。此外，对两岁以下儿童进行IAA检测也是有必要的。因此，3 Screen + IAA的测试策略更适合非常年幼的儿童。
参考文献：Törn C, Vaziri-Sani F, Ramelius A, Elding Larsson H, Ivarsson SA, Amoroso M, Furmaniak J, Powell M, Smith BR. Evaluation of the RSR 3 screen ICA™ and 2 screen ICA™ as screening assays for type 1 diabetes in Sweden. Acta Diabetol. 2022 Jun;59(6):773-781.