HEK-293T人胚肾细胞介绍：

种属：人；悬浮生长；生长周期：3~4天

HEK-293T细胞是293T（293tsA1609neo）细胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。细胞持续表达SV40抗原，该细胞常用于转染实验，转染效率较高。（转染一般以50%密度铺板，待细胞刚刚贴到皿壁上后（一般8-10小时），即可进行转染操作）。

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培 养 基：MEM培养基，90%；FBS，10%

生长条件：气相：空气,95%；二氧化碳，5%；温度：37 ℃

传代方法：1：2至1：6，每周2次

冻存条件：90%培养基+10% DMSO，液氮储存

支原体检测： 阴性

HEK-293T人胚肾细胞步骤：

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类：

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml YM，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。