人胚肾细胞293T的培养需要准备DMEM-H培养基，90%；优质胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。

　　1、培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　2、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　3、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过）。第二天换液并检查细胞密度。

　　4、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　如果在人胚肾细胞293T培养过程中出现贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　5、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

　　在人胚肾细胞293T培养过程中，需要注意以下两个事项：

　　1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　2.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。