很多科研小伙伴在细胞培养的过程中，总是出现各种各样的情况和问题，比如，细胞漏液、不贴壁、细胞有黑点、支原体污染、不增殖、细胞老化变形、复苏存活率低等等，这些问题对于参与细胞实验的小伙伴来说，是急需解决的大问题，好不容易买来的细胞，刚刚进行培养传代，就出现了以上的各种问题，这样的情况通常都会令小伙伴们无比抓狂。

因为想要开展后续实验，培养细胞往往是关键要事，细胞养不好，后续实验就无法进行。

如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、复苏存活率低等原因，而仍有上述一种或几种情况，那么还有一种情况发生，那就是你的细胞可能被污染了。所以不管发生哪种类型的污染情况都会造成相同的结果，就是实验需要重新做，这样不仅增加了实验成本，而且又浪费工作时间，还增加了实验的重复性。

而且以污染细胞和未污染细胞为基础进行实验时，有可能得到的实验结果*不同。更为严重的是，如果你所研究的细胞是另外一种细胞的话，那所做的所有工作可能会一文不值。

那么为什么一定要进行支原体污染清除呢？

支原体污染清除要求

从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。以细胞为载体的科学研究，如果不能保证所用的细胞无支原体污染，则实验结果很可能是不可靠甚至是*错误的！

支原体直径约为0.1-0.3 μm，具有变形能力，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，常用的抗生素也对支原体无效。支原体污染是细胞培养领域的一个世界性问题，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。

支原体可通过细胞之间交叉污染，操作人员的口腔、皮肤造成污染，或者血清等添加物而带入污染。

电镜下的支原体

支原体在光学显微镜下不可见，一般不会引起培养物混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。支原体会消耗必须氨基酸，影响细胞生长速率，促进代谢物积累，改变细胞形态，影响 DNA、RNA 以及蛋白质的合成，抑制细胞因子表达，改变被污染细胞的基因表达谱，诱导染色体畸变。

支原体的危害

支原体清除服务包括以下几个方面：

服务对象

1. 实验室的种子细胞，如从ATCC、JCRB、DMSZ等国外专业细胞库采购的珍贵细胞系；

2. 组织珍贵的原代细胞；

3. 需要进行基因编辑的细胞；

4. 各类干细胞（含iPS细胞）；

5. 稀有细胞。

服务内容

1.根据客户提供的细胞名称、细胞代次、细胞类型制定细胞的支原体清除方案；

2. 细胞STR鉴定（选做）；

3. 支原体PCR法检测支原体污染程度；

4. 细胞的支原体清除，一般污染单一支原体的清除时间为2周左右，感染多种支原体且非常严重的细胞，清除时间需要延长，约3-4左右；

5. 2-3周后，再次进行支原体检测，如果细胞支原体清除干净，将换为支原体预防培养方案，继续维持一周左右时间。如未清除干净，则适当延长1-2周继续清除顽固支原体，2周后再次进行复检。

服务周期与价格

送样要求

1. 复苏细胞（充液运输）：生长状态良好的细胞，待达70%-80%汇合时，去掉旧培养液换入新培养液，量要达到培养瓶的颈部（过满易污染），保留少许空间，旋紧瓶盖，避免空气过多运输中气泡运动易使细胞脱落。

2. 冻存细胞（干冰运输）：将干冰提前置于塑料泡沫盒中，以较快的速度将细胞冻存管从液氮转入干冰中，用胶带封好泡沫盒，在外面加套一层纸盒，延缓干冰挥发。

注：根据距离选择泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小于 50mm，内部空间不小于200× 200× 200mm，放入足量干冰。

支原体清除案例

如上图1所示，左侧为支原体污染的MCF-7细胞，右侧为支原体清除后的MCF-7细胞，倒置显微镜下可明显看出细胞间隙间黑点明显减少，细胞边缘清晰，状态良好。

如上图2所示，左侧为支原体污染的Hep G2细胞，右侧为支原体清除试剂处理的Hep G2细胞。左侧有支原体污染的细胞样品可以观察到细胞核周围微粒状或丝状蓝色荧光。支原体污染严重的细胞可以观察到大量微粒状或丝状蓝色荧光。右侧细胞支原体污染被清除干净，仅观察到细胞核的蓝色荧光，证明支原体已被清除干净。

注意事项

1. 由于各个实验室细胞培养体系不同，且更换体系细胞会需要一段时间的适应，故本服务需客户自行提供足量的培养体系；

2. 根据客户需求，STR鉴定服务为选做项目，镜像绮点生物承诺对于支原体清除服务细胞进行单独隔离培养，客户为保证实验严谨性，可选择我司进行STR鉴定服务；

3. 由于细胞随时可能会存在交叉的风险，只认可我司接收细胞后第yi时间进行的STR鉴定结果；

提供结果

原始支原体PCR结果图片和无支原体污染的细胞（根据客户需要选择充复苏/冻存发货形式）。

保密承诺

我公司郑重承诺：客户提供产品的检测信息与数据，履行保密义务，未经客户许可，不得擅自公开发表或使用，不得泄露给第三方。

支原体清除试剂

另外，镜像绮点还提供可有效抑制并清除多种支原体的支原体清除剂，包括 Mycoplasma orale, M. arginini, M. hyorhinis和Acholeplasma laidlawii。经过大量实验验证对细胞几乎没有毒性，对细胞的各种检测没有干扰。通常在细胞培养液中加入本试剂约1至2周即可有效抑制和清除支原体。

iCell支原体清除剂为透明淡黄色液体。具体的工作浓度因支原体的种类不同而有所不同，在实际防止支原体污染或清除支原体污染时需摸索适当的工作浓度。

支原体清除试剂经过了上百种细胞的测试和长期的实验验证，对细胞无害，对清除支原体污染*，能够很好的抑制和杀灭支原体。

所以，科研小伙伴们如果你们手里珍贵的细胞被支原体污染了，没有办法做实验，没有其他地方采购，千万不要扔掉，交给我们，相信我们，我们会还你一个状态好又无污染的好细胞，而且我们保证，不成功不收费的哦~~~