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MCF-7人乳腺癌细胞/STR鉴定
细胞介绍
该细胞是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性,包括:能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构(domes);该细胞表达WNT7B癌基因;TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长;抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。
细胞特性
1) 来源:腺癌,乳腺,胸水
2) 形态:上皮细胞样 贴壁生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完quan培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
MCF-7人乳腺癌细胞/STR鉴定
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备MEM(推荐iCell-0012)培养基;优质胎牛血清,10%;添加0.01mg/ml 胰岛素;双抗1%。
2) 注意事项:
a. mcf-7 细胞一般情况下是生长缓慢的细胞系,前期呈岛状生长,随着细胞生长,细胞会逐步变成扁平单层细胞。通常需要6-12天才能达到80%生长密度,如果生长速度比正常情况还要缓慢,可能需要换另外批次的血清,把血清浓度提高到20%也有助于改善细胞生长情况。
b. mcf-7细胞在复苏和传代后,会在培养基中观察到成团的细胞漂浮物,对于这个细胞来说这是正常的情况,在复苏和传代后前三天可以静置细胞不做处理,三天后贴壁情况会有所改善,但悬浮的细胞团仍会出现,这些悬浮的细胞是活细胞在换液和传代时需要离心回收,这些悬浮细胞团可以通过使用移液器(5mL或者更小)来吹散,重新打入到贴壁细胞培养瓶中。丢弃这些悬浮细胞会使细胞密度变低,细胞生长缓慢。
c. 使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化细胞。
3) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
4)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完quan培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。