U-Ch1 人骶骨脊索瘤细胞/STR鉴定

细胞介绍

U-CH1 是一种间充质样细胞系，于 1998 年从一名 56 岁白人男性脊索瘤患者的骶骨中分离出来。该细胞系是根据初次手术 4 年后放疗后骶尾部局部复发建立的。脊索瘤是一种罕见的生长缓慢的肿瘤类型，U-CH1是一种生长相对缓慢的细胞系。U-CH1具有由浆细胞和粘液性细胞间质组成的异质形态，代表典型的脊索瘤特征。这些细胞过度表达转录因子 T (Brachyury)，这是脊索瘤最特异的标志物。

细胞特性

1） 来源： 56岁白人男性脊索瘤患者的骶骨

2） 形态：间充质样，具有可变液泡（长梭形 不规则形状）贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完quan培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基来培养细胞。  收到细胞后一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

U-Ch1 人骶骨脊索瘤细胞/STR鉴定      

一．培养基及培养冻存条件准备

1） 准备IMDM（推荐iCell-0008）加RPMI-1640（推荐iCell-0002）(4:1) 培养基；优质胎牛血清，10%； 1 % L-谷an酰胺；双抗，1%。

注意：

1、使用大鼠尾 I 型胶原蛋白（BD Biosciences，目录号 354236）稀释至 50 μg/ml。将 2-3 ml 包被缓冲液加入烧瓶中，并在室温下孵育一小时或者使用细胞包被工作液（推荐iCell-8280）。小心吸出剩余溶液。使用 1x DPBS 冲洗烧瓶 2 次以去除酸。涂层烧瓶可立即使用，或在无菌条件下于 2-8 ℃保存长达一周。

2、该细胞生长缓慢。倍增时间1周多，发货估计3-4周 左右。  

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白mei-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化直至细胞层分散（通常在 5 至 15 分钟内）以使培养基达到正常 pH 值（7.0 至 7.6），然后在显微镜下观察细胞消化情况，为避免结块，在等待细胞分离时请勿敲击或摇动烧瓶来搅动细胞。难以分离的细胞可置于37°C以利于分散。若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的wan全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。