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经典培养基中不同成分的作用及选择原则

时间:2022-11-18      阅读:2886

一般实验室在确定培养基种类后,还会遇到培养基有不同分型的情况。那么对于经典培养基中不同成分的作用及选择原则又是什么呢?请往下看 ~


1.葡萄糖(Glucose):


作用:细胞生长所需的主要能量来源。


❖ 如何选择不同葡萄糖含量的培养基?


最初的 DMEM 中,葡萄糖浓度为 1 g/L,现在称其为低糖型 DMEM,适合培养多数哺乳动物细胞;

高糖型 DMEM 中的葡萄糖浓度为 4.5 g/L,适合生长速度快,附着性较差的肿瘤细胞;

使用无糖培养基的主要目的是,通过控制细胞的能量来源,研究细胞的代谢过程或葡萄糖利用效率


2.HEPES:


作用:pH 缓冲剂。


是一种氢离子缓冲剂,其作用不依赖于 CO2;

在一定范围内对细胞无毒性作用,能较长时间控制恒定的 pH 范围,保证细胞良好生长;

部分细胞对酸碱度的变化非常敏感,建议使用 HEPES;

根据需要,非必需。


3.L-谷氨酰胺(L-glutamine):


作用:L-谷氨酰胺是一种氨基酸,细胞的重要能量来源,参与蛋白质的合成,也为合成核酸提供碳源。


❖ 存在的不足:


L-谷氨酰胺不稳定,在中性的水溶液中会自发降解;

降解产物氨对细胞有毒性;

对氨敏感的细胞(如干细胞和原代细胞等)或培养环境(高密度反应器,无补料的长期培养)不推荐含 L-谷氨酰胺的培养基。


❖ 解决方案:


选择不含谷氨酰胺的培养基,在使用前再添加 L-谷氨酰胺,并尽快用完;

选择稳定的谷氨酰胺替代物,如 glutaGRO。


4.酚红(Phenol red):


作用:pH 值的指示剂(中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色)。


❖ 何时选择不含酚红的培养基?


培养干细胞或细胞克隆时倾向于不加酚红;

酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素);

酚红的颜色会干扰流式检测,不建议使用含酚红的培养基制备细胞样品(通常用 PBS)。


5.碳酸氢钠(Sodium bicarbonate):


作用:pH 缓冲剂。


pH 6.8~7.8 为细胞生长的最佳 pH 条件;

多数培养基利用碳酸氢钠进行缓冲;

碳酸氢钠的缓冲需要 CO2;

1.高碳酸氢钠(1.5~3.7 g/L)需要 5~10% CO2 培养;


2.低碳酸氢钠(0.35 g/L)不需要 CO2 培养。


干粉培养基在配制时需要单独添加。



6.丙酮酸钠(Sodium pyruvate):


作用:能量来源。


丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源;

葡萄糖不足的时候,细胞可以代谢丙酮酸钠;

保证细胞更好地生长;

根据需要,非必需组分。


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