这种橙色的荧光鬼笔环肽缀合物（相当于Alexa Fluor®555标记的鬼笔环蛋白）选择性结合F-actins。以纳摩尔浓度使用，鬼笔环肽衍生物是标记、鉴定和定量甲醛固定和渗透组织切片、细胞培养或无细胞实验中F-actins的方便探针。Phalloidin与肌动蛋白丝的结合比与肌动蛋白单体的结合更紧密，导致肌动蛋白亚基从丝端解离的速率常数降低，基本上通过防止丝解聚来稳定肌动蛋白丝。此外，发现鬼笔环肽抑制F-actin的ATP水解活性。Phalloidin在细胞中不同浓度下的作用不同。当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将聚合程度较低的细胞质肌动蛋白和丝蛋白募集到聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”中，但它不会干扰应力纤维，即粗的微丝束。鬼笔环肽的性质是一种有用的工具，可以通过用荧光类似物标记鬼笔环蛋白并将其用于在光学显微镜下染色肌动蛋白丝来研究F-肌动蛋白在细胞中的分布。鬼笔环肽的荧光衍生物已被证明在活细胞或固定细胞中定位肌动蛋白丝以及在体外可视化单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率研究肌动蛋白网络的重要工具。AAT Bioquest提供各种不同颜色的荧光鬼笔环肽衍生物，用于多色成像应用。

艾美捷鬼笔环肽-iFluor 555偶联物：

货号 AAT-23119

偶联物：iFluor 555

单位大小：300次测试

目录编号：23100、23101、23102、23103、23110、23111、23115、23116、23117、23119、23122、23125

分子量：~1300

溶剂：DMSO

校正因子（260纳米）：0.23

校正因子（280纳米）：0.14

消光系数（cm -1 M -1）：100000

激发（纳米）：557

发射（纳米）：570

量子产率：0.64

预期用途：仅供研究使用（RUO）

储存条件：冷冻（<-15°C）；尽量减少光照

协议概要：

在微孔板孔中准备样品

从板中的样品中移除液体

加入Phalloidin-iFluor™ 555偶联溶液（每孔100 μL）

在室温下对细胞进行20至90分钟的染色

洗涤细胞：

在显微镜下使用TRITC滤光片检查样本

重要事项     在打开前将瓶加热至室温并短暂离心。

储存和处理条件：

如果储存在-20°C，溶液至少稳定6个月。保护荧光偶联物不受光线影响，并避免冻融循环。

注意     Phalloidin有毒，尽管一瓶中的毒素量可能只对蚊子致命（Phalloidin的LD50 = 2 mg/kg），应小心处理。

工作溶液的准备：

Phalloidin-iFluor™ 555偶联工作溶液

将1 μL的Phalloidin-iFluor™ 555偶联溶液加入到含1% BSA的PBS中，制成1 mL的工作溶液。

注意     Phalloidin偶联物的库存溶液应分装并储存在-20°C，避免光线照射。

注意     不同细胞类型可能染色不同。应相应准备Phalloidin偶联工作溶液的浓度。

样品实验协议

染色细胞：

进行甲醛固定。在室温下用含3.0-4.0%甲醛的PBS孵育细胞10-30分钟。

注意     避免使用含甲醇的固定剂，因为甲醇可能会在固定过程中破坏肌动蛋白。s选的固定剂是无甲醇的甲醛。

用PBS冲洗固定细胞2-3次。

可选：将0.1% Triton X-100加入PBS中，用于固定细胞3至5分钟以增加通透性。用PBS冲洗细胞2-3次。

将Phalloidin-iFluor™ 555偶联工作溶液（100 μL/孔，96孔板）加入到固定细胞中，并在室温下对细胞进行20至90分钟的染色。

在将细胞板封盖和在显微镜下使用TRITC滤光片组进行成像之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以去除多余的Phalloidin偶联物。

图：用4%甲醛固定的HeLa细胞的荧光图像，然后分别用Phalloidin iFluor®555偶联物（Cat#23119，红色）和Nuclear Blue™DCS1（Cat#17548，蓝色）染色。

鬼笔环肽-iFluor 555偶联物文献参考：

LSD1 deficiency in breast cancer cells promotes the formation of pre-metastatic niches

Authors: Yao, Yutong and Qian, Rui and Gao, Hanwei and Dai, Yonghao and Shi, Yueru and An, Peipei and Xin, Benkai and Liu, Ziyu and Zhang, Nan and Wan, Youzhong and others,

Journal: npj Precision Oncology (2024): 260

ROS-Responsive and Self-Catalytic Nanocarriers for a Combination of Chemotherapy and Reinforced Ferroptosis against Breast Cancer

Authors: Zhang, Beibei and Liu, Hao and Wang, Yifei and Zhang, Yong

Journal: ACS Biomaterials Science \& Engineering (2024)

LSD1 inhibits the invasion and migration of breast cancer through exosomes

Authors: Zhang, Nan and Chen, Zhongyu and Xin, Benkai and Shi, Yueru and Yao, Yutong and Yang, Jingtong and Wang, Xiaoyu and Hu, Xin

Journal: Scientific Reports (2024): 20817

Meis1 Targets Protein Tyrosine Phosphatase Receptor J in Fibroblast to Retard Chronic Kidney Disease Progression

Authors: Bai, Mi and Xu, Shuang and Jiang, Mingzhu and Guo, Yuxian and Hu, Dandan and He, Jia and Wang, Ting and Zhang, Yu and Guo, Yan and Zhang, Yue and others,

Journal: Advanced Science (2024): 2309754

Patterning in stratified epithelia depends on cell--cell adhesion

Authors: Mai, Yosuke and Kobayashi, Yasuaki and Kitahata, Hiroyuki and Seo, Takashi and Nohara, Takuma and Itamoto, Sota and Mai, Shoko and Kumamoto, Junichi and Nagayama, Masaharu and Nishie, Wataru and others,

Journal: Life Science Alliance (2024)