荧光三NTA化合物为聚组氨酸标记蛋白的位点特异性和稳定的非共价荧光标记提供了一种有效的方法。与传统单NTA的瞬时结合相比，三NTA共轭荧光团的多价相互作用与聚组氨酸标记的蛋白质形成了更稳定的复合物。tris-NTA化合物对累积组氨酸的高选择性使其能够选择性标记细胞裂解物和活细胞表面的蛋白质。荧光三NTA偶联物可用于分析溶液和表面上的三元蛋白质复合物。过渡金属离子（如镍离子）介导的聚组氨酸标记蛋白质与荧光tris-NTA偶联物的络合为实时检测和监测蛋白质-蛋白质相互作用提供了灵敏的报告。据报道，这种OG488 tris-NTA化合物是一种灵敏的荧光探针，用于检测细胞、溶液和固体表面中的聚组氨酸标记蛋白。

艾美捷HIS Lite OG488-Tris NTA-Ni复合物：

货号 AAT-12615

单位大小：100微克

目录编号：12615

分子量：1838.08

溶剂：水

校正因子（260纳米）：0.31

校正因子（280纳米）：0.12

消光系数（cm -1 M -1）：76000

激发（纳米）：498

发射（纳米）：526

预期用途：仅供研究使用（RUO）

储存：冷冻（<-15°C）；尽量减少光照

激发：蓝色激光

发射：长路径绿色滤光片（SYBR滤光片）

库存溶液的准备：除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物库存溶液：通过添加适量的去离子水（ddH2O）制备5至10毫摩尔的库存溶液。

注意：将任何未使用的库存溶液储存在-20°C。避免反复冻融，并尽量减少光照。

工作溶液的准备：

HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物工作溶液

在PBS中制备1至10微米浓度的HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物工作溶液。

注意：确保有足够的工作溶液w全浸没凝胶。使用后，丢弃工作溶液，不要重复使用。

样品实验协议：

以下协议仅作为指导，并可能需要优化以更好地适应您的具体实验需求。

跑后凝胶染色协议：

根据您的标准协议运行凝胶。

将凝胶放置在合适的容器中。将凝胶固定在固定液中60分钟。注意：40%乙醇+10%醋酸可以作为固定液。

用超纯水两次洗涤凝胶。

将凝胶在HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物工作溶液中孵育60分钟。

注意：确保凝胶w全浸没在工作溶液中。

移除工作溶液，并用PBS两次洗涤凝胶。

立即进行凝胶成像。

体外复合物形成：

将带有His标签的蛋白溶液与HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物工作溶液按适当浓度混合。

注意：必须对HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物与带有His标签的蛋白混合物进行优化，以获得更好的标记。

注意：1至10微米的HIS Lite™ OG488-Tris NTA-Ni复合物可以用作起始浓度。

注意：反应可以在含有50 mM HEPES/KOH, pH 7.4, 100 mM KCl, 1 mM MgCl2, 2 mM β-巯基乙醇，5%甘油的缓冲液中进行，或者在您选择的缓冲液中进行。

混合物可以在室温下孵育30分钟，或在4°C下孵育。

注意：必须对孵育时间和条件进行优化，以获得更好的标记。

然后，混合物可以进行柱纯化或任何其他下游处理。