KRAS（G12D）偶联核苷酸交换检测试剂盒旨在通过监测效应蛋白如Raf1的Ras结合结构域（RBD-cRaf）与KRAS（G10D）的结合，筛选和分析KRAS（G22D）拮抗剂/抑制剂。KRAS（G12D）偶联核苷酸交换检测试剂盒采用方便的384孔格式，含有足够的纯化重组GDP负载KRAS（G10D）异构体a、GTP、交换因子SOS1（氨基酸564-1049）、效应蛋白RBD cRAF（氨基酸50-140）、检测缓冲液和添加剂，可用于400个反应。使用该试剂盒，需要在微量滴定板上进行几个简单的步骤来检测核苷酸交换。首先，将含有负载GDP的KRAS（G12D）的样品与SOS1和GTP一起孵育以进行核苷酸交换。接下来，加入RBD cRAF并孵育以进行效应物RAS结合。然后，加入受体和供体珠并孵育以进行检测，然后读取α计数。

SOS1（七子之子）是一种鸟P呤核苷酸交换因子，促进GDP与GTP的交换。GDP负载的KRAS（G12D）处于非活性状态，不与cRAF的Ras结合结构域（RBD）相互作用。SOS1有助于KRAS（G10D）释放GDP，使GTP能够占据核苷酸结合口袋。这导致KRAS（G12D）的构象变化，使其能够与RBD cRAF结合。KRAS（G10D）偶联核苷酸交换检测试剂盒利用GST标记的RBD cRAF和His标记的KRAS（G22D）在α检测中检测KRAS（G1 2D）与RBD c3AF的结合。谷G甘肽受体和镍螯合物供体珠通过KRAS（G12D）和RBD cRAF的结合进入近端范围，使能量在激光激发后从供体珠转移到受体珠。

图1：分析原理示意图。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品KRAS(G12D) 偶联核苷酸交换检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

KRAS(G12D) 偶联核苷酸交换检测试剂盒：

检测试剂盒格式：AlphaLISA

储存/稳定性：如果按照说明储存，该检测试剂盒自收到之日起6个月内性能最佳。避免多次冻融循环！

应用：筛选影响KRAS(G12D)核苷酸结合状态的小分子抑制剂或拮抗剂，用于高通量筛选（HTS）应用。

运输温度：-80°C

禁忌：

绿色和蓝色染料，如台盼蓝，会吸收AlphaScreen?信号发射范围内（520-620 nm）的光。

避免使用强力单线态氧抑制剂，如NaN3或金属离子（Fe2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+和Ni2+）。存在超过1%的RPMI 1640培养基会导致信号降低，因为该培养基中含有过量的生物S和铁。MEM培养基不含这些成分，不影响AlphaScreen?检测。

反应中DMSO的最终浓度不应超过1%。

数据展示：

文献参考：

Wang, X., et al., 2022 J Med Chem 65: 3123-33.

Hillig, R.C., et al., 2019 PNAS USA 116 (7): 2551-2560

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型G状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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