牛β乳球蛋白AELISA试剂盒

产品名称：牛β乳球蛋白AELISA试剂盒

英文名称：Bovine β-lactoglobulin AELISA kit

产品货号：KS18238

规格和产品性状：48T/96T，盒装液体

特色服务：牛β乳球蛋白AELISA试剂盒免费代测可上门取样（上海），

主要成分：酶标板，试剂，标准品等
检测方法：酶联免疫吸附法
样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
保存条件：2~8℃，合适温度6摄氏度，有效期6个月。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛β乳球蛋白（β-Lg）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛β乳球蛋白（β-Lg）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求

1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一夜后于2000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 2000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  细胞培养物上清或其它生物标本：2000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材

• 酶标仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
• 37℃恒温箱
• 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成

备注：

1.  标准品浓度依次为：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL

2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过zui大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

注意事项

• 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
• 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
• 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
• 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
• 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
• 在储存和温育时避免强光直接照射。
• 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
• 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
• 不能使用过期产品。
• 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

操作步骤

•   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
•   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
•   样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
•   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
•   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
•   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
•   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

•  检测范围：6.25 μg/mL – 200 μg/mL。
•  灵敏度：低检测浓度小于1.0 μg/mL。
•  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
•  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

说明

• 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。
• 终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。
• 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，电子版说明书仅作参考。
• 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到*的检测结果。

牛β乳球蛋白AELISA试剂盒操作流程如下：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。　
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。　
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　
（6）洗板，同（4）。　
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。　
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。　
（9）洗板，同（4）。　
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。　
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。　
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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